公开(公告)号：CN116262910A

公开(公告)日：2023-06-16

申请号：CN202111517914.1

申请日：2021-12-13

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  马志倩 ,  郑海学 ,  李志伟 ,  杨帆 ,  李洋 ,  曹伟军 ,  冯英桐 ,  刘华南

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N5/071 ,  C12N5/10 ,  C12N15/86 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒重组毒株、构建方法及应用。本发明将现有流行的猪流行性腹泻病毒PEDV CH/SX/2016株的S基因序列替换为SEQ ID NO.1所示的S2015基因序列后构建获得了一种PEDV CH/SX/2016株感染性克隆，将含有SEQ ID NO.4所示的感染性cDNA的质粒转染细胞，成功拯救获得了一株猪流行性腹泻病毒重组毒株rCH/SX/2016‑S2015；解决了原毒株无法利用反向遗传学工程被成功拯救的问题，获得的重组病毒株rCH/SX/2016‑S2015具有与原毒株相当的活性，可用于制备PEDV诊断试剂和/或疫苗。

公开(公告)号：CN110229792A

公开(公告)日：2019-09-13

申请号：CN201910377451.X

申请日：2019-05-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  李洋 ,  马志倩 ,  李志伟

IPC: C12N7/00 ,  C12N15/85 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了SD-YL1712毒株及其感染性克隆的构建方法和应用，分离流行毒株并构建的感染性克隆不仅可以在分子层面实现对该毒株的改造，从而为探究PRRSV毒株致病机制，免疫逃避机制，细胞嗜性改变机制等基础研究提供有效辅助；还可以作为一种理想的载体工具，为外源基因的插入提供了良好的平台，并能顺利实现体内的共拯救。

公开(公告)号：CN111544583A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010413064.X

申请日：2020-05-15

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  李志伟 ,  马志倩 ,  李爽

IPC: A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61K9/51 ,  A61K47/38 ,  A61K47/36 ,  C12N15/70 ,  C12N15/50

Abstract: 本发明公开了CS/HPMCP纳米微粒在口服疫苗递送中的应用，属于动物病毒学和动物基因工程技术领域。为了检测CS/HPMCP纳米微粒口服递送的免疫效力，本发明选取猪流行性腹泻病毒作为试验对象；本发明通过大肠杆菌表达系统表达COE蛋白，进一步通过离子交联方法制备了载有COE的CS/HPMCP纳米颗粒，并且评估了给小鼠口服载有COE的CS/HPMCP纳米微粒后，小鼠的体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫；旨在为研发口服型纳米微粒佐剂提供有力的技术支持，同时为PEDV口服型亚单位疫苗的研究奠定前期基础。

公开(公告)号：CN110016078B

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN201910233889.0

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  马志倩 ,  王天宇 ,  田阳升 ,  李爽

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用，本发明以PEDV N蛋白包被酶标板，纳米抗体BioNb2为阻断抗体，通过待检血清样品抑制纳米抗体BioNb2与PEDV N蛋白结合，以检测血清中猪流行性腹泻病毒特异性抗体；本发明的阻断ELISA方法能够排除抗原中的杂蛋白成分的干扰而具有良好的特异性，且操作简单，易于大范围推广，在猪流行性腹泻病毒的血清诊断方面具有良好的应用前景；本发明通过大量的实验优化阻断ELISA反应条件，使该方法用于猪流行性腹泻病毒抗体检测具有良好的重复性、特异性和灵敏性，与目前已有的商品化试剂盒相比，具有简便、快速、成本低廉等优势。

公开(公告)号：CN110016078A

公开(公告)日：2019-07-16

申请号：CN201910233889.0

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  马志倩 ,  王天宇 ,  田阳升 ,  李爽

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用，本发明以PEDV N蛋白包被酶标板，纳米抗体BioNb2为阻断抗体，通过待检血清样品抑制纳米抗体BioNb2与PEDV N蛋白结合，以检测血清中猪流行性腹泻病毒特异性抗体；本发明的阻断ELISA方法能够排除抗原中的杂蛋白成分的干扰而具有良好的特异性，且操作简单，易于大范围推广，在猪流行性腹泻病毒的血清诊断方面具有良好的应用前景；本发明通过大量的实验优化阻断ELISA反应条件，使该方法用于猪流行性腹泻病毒抗体检测具有良好的重复性、特异性和灵敏性，与目前已有的商品化试剂盒相比，具有简便、快速、成本低廉等优势。

公开(公告)号：CN109678953A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811583463.X

申请日：2018-12-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  李爽 ,  马志倩 ,  田阳升 ,  王天宇

IPC: C07K16/10 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

CPC classification number: C07K16/10 ,  C07K2317/569 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白N的VHH噬菌体展示文库的构建方法及用途，构架方法包括以下步骤：免疫后的双峰驼分离外周血淋巴细胞、淋巴细胞总RNA的提取及反转录获得cDNA，设计两对PCR扩增引物，获得目的片段，将获得的目的片段与噬菌粒载体pCANTAB-5E连接，将连接产物转化入TG1感受态细胞中并收获噬菌体抗体文库；成功构建抗猪流性腹泻病毒N蛋白的VHH噬菌体展示文库；计算文库库容量及文库的多样性；对所构建的文库进行质量评价。本发明建立的文库库容量大，多样性丰富等特点，对于建立猪流行性腹泻病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定了基础。