公开(公告)号：CN110016078B

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN201910233889.0

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  马志倩 ,  王天宇 ,  田阳升 ,  李爽

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用，本发明以PEDV N蛋白包被酶标板，纳米抗体BioNb2为阻断抗体，通过待检血清样品抑制纳米抗体BioNb2与PEDV N蛋白结合，以检测血清中猪流行性腹泻病毒特异性抗体；本发明的阻断ELISA方法能够排除抗原中的杂蛋白成分的干扰而具有良好的特异性，且操作简单，易于大范围推广，在猪流行性腹泻病毒的血清诊断方面具有良好的应用前景；本发明通过大量的实验优化阻断ELISA反应条件，使该方法用于猪流行性腹泻病毒抗体检测具有良好的重复性、特异性和灵敏性，与目前已有的商品化试剂盒相比，具有简便、快速、成本低廉等优势。

公开(公告)号：CN110016078A

公开(公告)日：2019-07-16

申请号：CN201910233889.0

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  马志倩 ,  王天宇 ,  田阳升 ,  李爽

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用，本发明以PEDV N蛋白包被酶标板，纳米抗体BioNb2为阻断抗体，通过待检血清样品抑制纳米抗体BioNb2与PEDV N蛋白结合，以检测血清中猪流行性腹泻病毒特异性抗体；本发明的阻断ELISA方法能够排除抗原中的杂蛋白成分的干扰而具有良好的特异性，且操作简单，易于大范围推广，在猪流行性腹泻病毒的血清诊断方面具有良好的应用前景；本发明通过大量的实验优化阻断ELISA反应条件，使该方法用于猪流行性腹泻病毒抗体检测具有良好的重复性、特异性和灵敏性，与目前已有的商品化试剂盒相比，具有简便、快速、成本低廉等优势。

公开(公告)号：CN109678953A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811583463.X

申请日：2018-12-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 肖书奇 ,  李爽 ,  马志倩 ,  田阳升 ,  王天宇

IPC: C07K16/10 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

CPC classification number: C07K16/10 ,  C07K2317/569 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白N的VHH噬菌体展示文库的构建方法及用途，构架方法包括以下步骤：免疫后的双峰驼分离外周血淋巴细胞、淋巴细胞总RNA的提取及反转录获得cDNA，设计两对PCR扩增引物，获得目的片段，将获得的目的片段与噬菌粒载体pCANTAB-5E连接，将连接产物转化入TG1感受态细胞中并收获噬菌体抗体文库；成功构建抗猪流性腹泻病毒N蛋白的VHH噬菌体展示文库；计算文库库容量及文库的多样性；对所构建的文库进行质量评价。本发明建立的文库库容量大，多样性丰富等特点，对于建立猪流行性腹泻病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定了基础。