用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法

    公开(公告)号:CN102226199A

    公开(公告)日:2011-10-26

    申请号:CN201110109950.4

    申请日:2011-04-29

    Abstract: 本发明公开了一种用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法,以山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列BLG5作为5’端同源臂,以山羊β-乳球蛋白基因3’端包含第6、第7外显子及下游的序列BLG3作为3’端同源臂,以第5外显子和第5内含子的部分序列E5作为连接序列用以将正筛选标记基因置于第5内含子中;将BLG5、目的基因及E5顺次连接,再和BLG3分别连接到通用型打靶载体中正筛选标记两侧。在需要时可以将目标蛋白的基因组DNA或cDNA序列插入到该通用打靶载体的目的基因位置处或直接置换掉原来的目的基因,然后用所获得的打靶载体转染山羊胎儿成纤维细胞或其他细胞,筛选出中靶的细胞,通过体细胞核移植技术获得能在乳腺中生产目标蛋白的转基因山羊。

    一种奶牛重组促卵泡素及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN120060373A

    公开(公告)日:2025-05-30

    申请号:CN202510226837.6

    申请日:2025-02-27

    Abstract: 本发明涉及动物养殖技术领域,具体公开了一种奶牛重组促卵泡素及其制备方法和应用,所述奶牛重组促卵泡素的制备步骤包括重组质粒pcDNA3.1‑rFSH的构建;以该重组质粒为模板,PCR扩增回收α与β‑CTP目的片段,将含有α与β‑CTP目的片段进行同源重组和转化获得重组FSH慢病毒载体pCD513B‑rFSH,然后转染CHO‑K1细胞并筛选获得单克隆细胞株,通过对单克隆细胞株培养并收集细胞上清液,分离纯化出奶重组牛促卵泡素。本发明提供的方法制得的奶牛重组促卵泡素具有生物活性稳定,显著促进颗粒细胞的增殖。

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