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公开(公告)号：CN105985935A
公开(公告)日：2016-10-05
申请号：CN201510048275.7
申请日：2015-01-30
申请人： 清华大学 , 清华大学无锡应用技术研究院
IPC分类号： C12N9/02 , C12N15/53 , A62D3/02 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了一种黄嘌呤脱氢酶截断体及其应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶截断体小亚基、黄嘌呤脱氢酶截断体中亚基和黄嘌呤脱氢酶截断体大亚基。本发明提供黄嘌呤脱氢酶截断体，其比野生型对底物(黄嘌呤)的亲和力提高19％，转化数提高115％，催化效率提高166％，耐温性提高11℃，有利于与其他酶类联用进一步开发新的应用领域，尤其适合于样品检测，包括黄嘌呤和次黄嘌呤的检测，与PNP酶联用检测无机磷酸，与PNP、XOD和POD酶联用检测腺苷脱氨酶，和5`-核苷酸酶的检测，同时适合于工业化应用，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。
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公开(公告)号：CN105985935B
公开(公告)日：2019-06-11
申请号：CN201510048275.7
申请日：2015-01-30
申请人： 清华大学 , 清华大学无锡应用技术研究院
IPC分类号： C12N9/02 , C12N15/53 , A62D3/02 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了一种黄嘌呤脱氢酶截断体及其应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶截断体小亚基、黄嘌呤脱氢酶截断体中亚基和黄嘌呤脱氢酶截断体大亚基。本发明提供黄嘌呤脱氢酶截断体，其比野生型对底物(黄嘌呤)的亲和力提高19％，转化数提高115％，催化效率提高166％，耐温性提高11℃，有利于与其他酶类联用进一步开发新的应用领域，尤其适合于样品检测，包括黄嘌呤和次黄嘌呤的检测，与PNP酶联用检测无机磷酸，与PNP、XOD和POD酶联用检测腺苷脱氨酶，和5`‑核苷酸酶的检测，同时适合于工业化应用，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。
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公开(公告)号：CN106318918B
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201510406718.5
申请日：2015-07-10
申请人： 无锡源清天木生物科技有限公司 , 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种碱性黄嘌呤脱氢酶及其在检测试剂盒中的应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶大亚基和黄嘌呤脱氢酶小亚基。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶，为首次报道的经过实验证实的鲍氏不动杆菌属黄嘌呤脱氢酶类。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶可以适应碱性测定条件的样品，比已有报道具有更高的底物亲和力和最高的催化效率，可以更加灵敏地降解和检测次黄嘌呤/黄嘌呤和PNP酶和5`‑核苷酸酶，与PNP酶联用检测无机磷酸和腺苷脱氨酶，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。本发明还提供将黄嘌呤脱氢酶用于检测包括血清和尿液在内的样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的方法。本发明进一步提供检测样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的检测试剂盒。本发明所提供检测方法和检测试剂盒不受样品中溶解氧影响，比现有技术检测范围更宽、灵敏度更高，便于推广应用。
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公开(公告)号：CN106318918A
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201510406718.5
申请日：2015-07-10
申请人： 无锡源清天木生物科技有限公司 , 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种碱性黄嘌呤脱氢酶及其在检测试剂盒中的应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶大亚基和黄嘌呤脱氢酶小亚基。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶，为首次报道的经过实验证实的鲍氏不动杆菌属黄嘌呤脱氢酶类。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶可以适应碱性测定条件的样品，比已有报道具有更高的底物亲和力和最高的催化效率，可以更加灵敏地降解和检测次黄嘌呤/黄嘌呤和PNP酶和5`-核苷酸酶，与PNP酶联用检测无机磷酸和腺苷脱氨酶，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。本发明还提供将黄嘌呤脱氢酶用于检测包括血清和尿液在内的样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的方法。本发明进一步提供检测样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的检测试剂盒。本发明所提供检测方法和检测试剂盒不受样品中溶解氧影响，比现有技术检测范围更宽、灵敏度更高，便于推广应用。
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公开(公告)号：CN106556581B
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201510619034.3
申请日：2015-09-24
申请人： 无锡源清天木生物科技有限公司 , 清华大学无锡应用技术研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 等离子体对体外DNA断裂损伤强度的快速检测方法，用于测定包括常压室温等离子体(ARTP)在内的等离子体诱变方法对DNA的损伤强度，包括如下步骤：1)利用等离子体诱变方法处理DNA包覆微球，并设置未经等离子体处理的对照组；2)洗涤后，利用染料对DNA包覆微球进行染色；3)利用荧光检测仪测定染色后DNA包覆微球的荧光值；4)根据荧光值计算对照组及等离子体诱变处理后微球上DNA的相对含量，判断等离子体的基因损伤强度。本发明利用DNA包覆微球建立了一种体外DNA损伤强度的快速检测方法，从而直接有效评价等离子体对DNA的损伤强度。
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公开(公告)号：CN105754979B
公开(公告)日：2020-03-17
申请号：CN201410778633.5
申请日：2014-12-15
申请人： 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种MBP融合肝素酶Ⅱ，该MBP融合肝素酶Ⅱ是如下a）或b）的蛋白：a）序列表中序列1的氨基酸序列组成的蛋白；b）序列表中序列1氨基酸序列经过对构成MBP融合肝素酶Ⅱ蛋白中肝素酶Ⅱ二聚体结合面的33个氨基酸位点中的一个或多个定点突变的蛋白。上述蛋白的编码基因及制备方法也属于本发明的保护范围。本发明通过基因工程手段对MBP融合肝素酶Ⅱ进行定点突变，最终获得催化活性及热稳定性都明显提高的MBP融合肝素酶Ⅱ。
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公开(公告)号：CN105753945B
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201410769966.1
申请日：2014-12-15
申请人： 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种连接肽及其应用。本发明的连接肽主要应用于制备MBP融合多糖裂解酶，具体涉及MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。MBP融合表达系统中，通过该连接肽应用来提高MBP助溶、助折叠，增加目标蛋白的活性以及热稳定性，最终获得在大肠杆菌中的发酵酶活初步达到工业应用水平、且具有优秀热稳定性的MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。
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公开(公告)号：CN105754979A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201410778633.5
申请日：2014-12-15
申请人： 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种MBP融合肝素酶Ⅱ，该MBP融合肝素酶Ⅱ是如下a）或b）的蛋白：a）序列表中序列1的氨基酸序列组成的蛋白；b）序列表中序列1氨基酸序列经过对构成MBP融合肝素酶Ⅱ蛋白中肝素酶Ⅱ二聚体结合面的33个氨基酸位点中的一个或多个定点突变的蛋白。上述蛋白的编码基因及制备方法也属于本发明的保护范围。本发明通过基因工程手段对MBP融合肝素酶Ⅱ进行定点突变，最终获得催化活性及热稳定性都明显提高的MBP融合肝素酶Ⅱ。
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公开(公告)号：CN106556581A
公开(公告)日：2017-04-05
申请号：CN201510619034.3
申请日：2015-09-24
申请人： 无锡源清天木生物科技有限公司 , 清华大学无锡应用技术研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 等离子体对体外DNA断裂损伤强度的快速检测方法，用于测定包括常压室温等离子体(ARTP)在内的等离子体诱变方法对DNA的损伤强度，包括如下步骤：1)利用等离子体诱变方法处理DNA包覆微球，并设置未经等离子体处理的对照组；2)洗涤后，利用染料对DNA包覆微球进行染色；3)利用荧光检测仪测定染色后DNA包覆微球的荧光值；4)根据荧光值计算对照组及等离子体诱变处理后微球上DNA的相对含量，判断等离子体的基因损伤强度。本发明利用DNA包覆微球建立了一种体外DNA损伤强度的快速检测方法，从而直接有效评价等离子体对DNA的损伤强度。
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公开(公告)号：CN105753945A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201410769966.1
申请日：2014-12-15
申请人： 清华大学无锡应用技术研究院
摘要： 本发明公开了一种连接肽及其应用。本发明的连接肽主要应用于制备MBP融合多糖裂解酶，具体涉及MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。MBP融合表达系统中，通过该连接肽应用来提高MBP助溶、助折叠，增加目标蛋白的活性以及热稳定性，最终获得在大肠杆菌中的发酵酶活初步达到工业应用水平、且具有优秀热稳定性的MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。
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