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    检测可逆性阻断dNTP中非阻断杂质含量的方法和试剂盒
    2.
    发明授权
    检测可逆性阻断dNTP中非阻断杂质含量的方法和试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN108239669B

    公开(公告)日：2021-03-16

    申请号：CN201611208173.8

    申请日：2016-12-23

    申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

    发明人： 龚梅花 ,  王静静 ,  罗银铃 ,  罗宇芬 ,  李长英 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  章文蔚

    IPC分类号： C12Q1/6851

    摘要： 本发明公开了一种检测可逆性阻断dNTP中非阻断杂质含量的方法和试剂盒，该方法包括：(a)获取至少一装载有核酸的芯片和至少一已知序列，该已知序列与核酸上的部分序列互补；形成互补后，核酸在沿已知序列的延伸方向上紧接有两个特异的待测碱基，第一个碱基与待检测的可逆性阻断dNTP互补，第二个碱基与带荧光的dNTP互补；(b)在DNA聚合酶的作用下，首先至少加入待检测的可逆性阻断dNTP，使已知序列延伸一个碱基；然后加入带荧光的dNTP，使至少部分序列继续延伸一个碱基；(c)采集反应后产物的荧光信号，并根据荧光信号的强度推算出待检测的可逆性阻断dNTP中非阻断杂质的含量。本发明的方法能够进一步评估可逆性阻断dNTP的纯度，并且精确度更高。

    适用于以二硫键作为可断连接单元修饰dNTP的测序方法
    3.
    发明公开
    适用于以二硫键作为可断连接单元修饰dNTP的测序方法 审中-实审

    公开(公告)号：CN116411056A

    公开(公告)日：2023-07-11

    申请号：CN202111672468.1

    申请日：2021-12-31

    申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

    发明人： 李长英 ,  王静静 ,  贾曼 ,  罗宇芬 ,  王雅蒙 ,  许颖颖 ,  徐崇钧

    IPC分类号： C12Q1/6869

    摘要： 本发明涉及一种高通量测序方法。包括1)提供包含两端含测序接头的基因组DNA片段的测序文库；2)基因组DNA片段的单链DNA与固相基质表面的引物互补配对；3)DNA聚合酶和带有阻断基团和荧光标记的dNTP加入到固相基质上；4)以基因组DNA片段为模板合成碱基，读取荧光值；5)去除新合成碱基3’端阻断基团和荧光标记，重复4)直到合成双链DNA；6)利用DNA聚合酶扩增生成二链测序的模板；7)DNA聚合酶和带有阻断基团与荧光标记的dNTP加入到固相基质上合成碱基；8)去除新合成碱基3’端阻断基团和荧光标记，重复7)。该方法可有效避免测序过程中的酶与修饰dNTP上的二硫键发生反应，保证测序正常进行。

    快速检测DNA聚合酶3′-5′外切活性或错配的方法和试剂盒
    6.
    发明授权
    快速检测DNA聚合酶3′-5′外切活性或错配的方法和试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN109652499B

    公开(公告)日：2022-06-03

    申请号：CN201710947575.8

    申请日：2017-10-12

    申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

    发明人： 王静静 ,  章文蔚 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  龚梅花 ,  罗银铃 ,  罗宇芬 ,  李长英

    IPC分类号： C12Q1/6816 ,  C12Q1/34

    摘要： 快速检测DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配的方法和试剂盒。本方法包括：提供一段已知序列的核酸，以及检测引物，其与已知序列的核酸互补配对且3'羟基端的最后一个脱氧核苷酸和待聚合的前两位脱氧核苷酸互不相同；使已知序列的核酸和检测引物杂交，加入待测DNA聚合酶以及带荧光标记的、与待聚合的脱氧核苷酸不同的脱氧核苷酸进行第一次信号收集；加入无外切活性的Taq DNA聚合酶，并且分别加入带荧光标记的第一位待聚合的脱氧核苷酸和带荧光标记的第二位待聚合的脱氧核苷酸，进行第二次信号收集；综合分析第一次信号和第二次信号，判断待测DNA聚合酶是否发生外切或错配。可检测在四种核苷酸单独存在于反应体系时DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配。