公开(公告)号：CN109652501B

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN201710948000.8

申请日：2017-10-12

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 李长英 ,  章文蔚 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  龚梅花 ,  王静静 ,  罗银玲 ,  罗宇芬

IPC分类号： C12Q1/6816 ,  C12Q1/34

摘要： 本发明公开了一种检测核酸酶对特定碱基3'‑5'外切活性的方法和试剂盒。本发明首次提出检测酶对特定碱基的外切活性；利用该发明可以检测任一碱基，包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP、dUTP以及简并碱基等，应用范围十分广泛；该发明可以检测大多数核酸酶的3’‑5’外切活性；使用荧光作为检测信号，避免了放射性污染，且灵敏度高；无需荧光基团修饰的核苷酸链，成本低；可以用来快速大量地筛选核酸酶，应用灵活，通量高。

公开(公告)号：CN108239669B

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN201611208173.8

申请日：2016-12-23

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 龚梅花 ,  王静静 ,  罗银铃 ,  罗宇芬 ,  李长英 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  章文蔚

IPC分类号： C12Q1/6851

摘要： 本发明公开了一种检测可逆性阻断dNTP中非阻断杂质含量的方法和试剂盒，该方法包括：(a)获取至少一装载有核酸的芯片和至少一已知序列，该已知序列与核酸上的部分序列互补；形成互补后，核酸在沿已知序列的延伸方向上紧接有两个特异的待测碱基，第一个碱基与待检测的可逆性阻断dNTP互补，第二个碱基与带荧光的dNTP互补；(b)在DNA聚合酶的作用下，首先至少加入待检测的可逆性阻断dNTP，使已知序列延伸一个碱基；然后加入带荧光的dNTP，使至少部分序列继续延伸一个碱基；(c)采集反应后产物的荧光信号，并根据荧光信号的强度推算出待检测的可逆性阻断dNTP中非阻断杂质的含量。本发明的方法能够进一步评估可逆性阻断dNTP的纯度，并且精确度更高。

公开(公告)号：CN118401679A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202280083891.4

申请日：2022-05-07

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 李长英 ,  李计广 ,  徐崇钧

IPC分类号： C12Q1/6869 ,  C12N15/10 ,  C12Q1/6806

摘要： 一种在测序中使用的占位引物和去除方法。所述占位引物包括3′端的阻断基团，且所述占位引物的3′端序列与测序模板的部分序列互补，5′端序列不与所述测序模板配对。一种去除引物和相关的测序方法。通过在占位引物的5′端引入一段不与模板配对的序列，利用DNA的分支迁移作用在需要去除占位引物时，可以容易地将占位引物去除。

公开(公告)号：CN109652499B

公开(公告)日：2022-06-03

申请号：CN201710947575.8

申请日：2017-10-12

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 王静静 ,  章文蔚 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  龚梅花 ,  罗银铃 ,  罗宇芬 ,  李长英

IPC分类号： C12Q1/6816 ,  C12Q1/34

摘要： 快速检测DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配的方法和试剂盒。本方法包括：提供一段已知序列的核酸，以及检测引物，其与已知序列的核酸互补配对且3'羟基端的最后一个脱氧核苷酸和待聚合的前两位脱氧核苷酸互不相同；使已知序列的核酸和检测引物杂交，加入待测DNA聚合酶以及带荧光标记的、与待聚合的脱氧核苷酸不同的脱氧核苷酸进行第一次信号收集；加入无外切活性的Taq DNA聚合酶，并且分别加入带荧光标记的第一位待聚合的脱氧核苷酸和带荧光标记的第二位待聚合的脱氧核苷酸，进行第二次信号收集；综合分析第一次信号和第二次信号，判断待测DNA聚合酶是否发生外切或错配。可检测在四种核苷酸单独存在于反应体系时DNA聚合酶3'‑5'外切活性或错配。

公开(公告)号：CN108070642B

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN201710349201.6

申请日：2017-05-17

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 龚梅花 ,  王静静 ,  罗银铃 ,  罗宇芬 ,  李长英 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  章文蔚

IPC分类号： C12Q1/6869

摘要： 本发明公开了一种提高DNB双末端测序质量的方法和DNB双末端测序方法和试剂盒。本发明的提高DNB双末端测序质量的方法，包括：对DNA纳米球进行一链合成测序时，使用部分dUTP代替dTTP进行联合探针锚定聚合测序；在所述一链合成测序完成后，使用USER酶消化一链上的尿嘧啶，然后使用变性剂洗脱一链或使用外切酶消化一链。本发明的方法能够实现完全去除一链的目的，降低一链对二链的负面影响，从而提高DNB双末端测序的读长和质量。

公开(公告)号：CN116411056A

公开(公告)日：2023-07-11

申请号：CN202111672468.1

申请日：2021-12-31

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 李长英 ,  王静静 ,  贾曼 ,  罗宇芬 ,  王雅蒙 ,  许颖颖 ,  徐崇钧

IPC分类号： C12Q1/6869

摘要： 本发明涉及一种高通量测序方法。包括1)提供包含两端含测序接头的基因组DNA片段的测序文库；2)基因组DNA片段的单链DNA与固相基质表面的引物互补配对；3)DNA聚合酶和带有阻断基团和荧光标记的dNTP加入到固相基质上；4)以基因组DNA片段为模板合成碱基，读取荧光值；5)去除新合成碱基3’端阻断基团和荧光标记，重复4)直到合成双链DNA；6)利用DNA聚合酶扩增生成二链测序的模板；7)DNA聚合酶和带有阻断基团与荧光标记的dNTP加入到固相基质上合成碱基；8)去除新合成碱基3’端阻断基团和荧光标记，重复7)。该方法可有效避免测序过程中的酶与修饰dNTP上的二硫键发生反应，保证测序正常进行。

公开(公告)号：CN109652500B

公开(公告)日：2021-12-14

申请号：CN201710947998.X

申请日：2017-10-12

申请人： 深圳华大智造科技股份有限公司

发明人： 王静静 ,  章文蔚 ,  陈奥 ,  徐崇钧 ,  龚梅花 ,  罗银玲 ,  罗宇芬 ,  李长英

IPC分类号： C12Q1/6816 ,  C12Q1/48

摘要： 本发明公开了快速检测和筛选能聚合特殊构造dNTP的DNA聚合酶的方法。本发明提供了种检测待测DNA聚合酶能否聚合特定结构dNTP的方法，包括如下步骤：1)制备一段单链DNA分子和与其互补的杂交单链；所述单链DNA分子中从5‘至3’方向上包括依次排列的相邻的碱基乙和碱基甲；2)将所述单链DNA分子、所述杂交单链、所述特定结构dNTP和待测DNA聚合酶放在体系里进行DNA聚合反应，检测是否能成功聚合。本发明的检测方法具有如下优点：适用范围广、无污染、可行性、通量灵活，高通量。