一种用于MALDI‑TOF MS检测的植物线虫前处理方法

    公开(公告)号:CN104596816B

    公开(公告)日:2017-10-10

    申请号:CN201510012165.5

    申请日:2015-01-09

    IPC分类号: G01N1/28 G01N27/64

    摘要: 本发明公开了一种用于MALDI‑TOF MS检测的植物线虫前处理方法,包括如下步骤:(1)在灭菌的载片上滴加提取液,所述提取液的滴加量为每条所述植物线虫滴加5‑8μl;(2)在体视显微镜下将清洗好的所述植物线虫转移到所述载片上的提取液中,并压破所述植物线虫,所述提取液用于提取所述植物线虫的蛋白质并将所述蛋白质水解为多肽;(3)在体视显微镜下,用移液枪吸取步骤(2)中的提取液并连带压破的植物线虫一起滴加在样品板上,并晾干;(4)在晾干后的样品板上加基质溶液,使所述多肽分散在所述基质溶液中,并晾干得到用于MALDI‑TOF MS检测的样品,每条所述植物线虫加1‑1.5μl的所述基质溶液。本发明的方法易于操作、结果重复性好、背景信号低且灵敏度高。

    一种用于MALDI-TOFMS检测的植物线虫前处理方法

    公开(公告)号:CN104596816A

    公开(公告)日:2015-05-06

    申请号:CN201510012165.5

    申请日:2015-01-09

    IPC分类号: G01N1/28 G01N27/64

    摘要: 本发明公开了一种用于MALDI-TOF MS检测的植物线虫前处理方法,包括如下步骤:(1)在灭菌的载片上滴加提取液,所述提取液的滴加量为每条所述植物线虫滴加5-8μl;(2)在体视显微镜下将清洗好的所述植物线虫转移到所述载片上的提取液中,并压破所述植物线虫,所述提取液用于提取所述植物线虫的蛋白质并将所述蛋白质水解为多肽;(3)在体视显微镜下,用移液枪吸取步骤(2)中的提取液并连带压破的植物线虫一起滴加在样品板上,并晾干;(4)在晾干后的样品板上加基质溶液,使所述多肽分散在所述基质溶液中,并晾干得到用于MALDI-TOF MS检测的样品,每条所述植物线虫加1-1.5μl的所述基质溶液。本发明的方法易于操作、结果重复性好、背景信号低且灵敏度高。

    一种实时荧光聚合酶链反应检测香蕉穿孔线虫的方法

    公开(公告)号:CN101633958A

    公开(公告)日:2010-01-27

    申请号:CN200910108232.8

    申请日:2009-06-17

    IPC分类号: C12Q1/68 G01N21/64

    摘要: 一种实时荧光聚合酶链反应检测香蕉穿孔线虫的方法,探针序列是:5′-FAM-AGCGGTTGTAGTCCAT-MGB-3′;正、反向引物序列分别是:5′-CTGGGTTGGCGTCTGTGAGT-3′、5′-CGACCTACGAGCCGAGTGA-3′。线虫的核酸提取方法提取效率高,提取的核酸纯度高。采用实时荧光PCR扩增仪可快速准确地对香蕉穿孔线虫,甚至单条香蕉穿孔线虫的幼虫、雌虫和雄虫进行检疫、检测和鉴定。反应时间仅为45分钟,检测结果直接显示在电脑屏幕上,无需电泳,节省时间,避免污染。且扩增灵敏度高,能够以单条香蕉穿孔线虫DNA含量的1/40为DNA样本模板进行PCR扩增反应。