公开(公告)号：CN109486779A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811291824.3

申请日：2018-10-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  李胜杰 ,  王梁燕 ,  蔡建玲

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/1007 ,  C12N15/70 ,  C12Y201/01113

Abstract: 本发明公开了一种DNA甲基转移酶及其可溶性异源表达和分离纯化方法。本发明首次从耐辐射奇球菌中分离纯化出具有DNA甲基转移酶活性并且在缓冲液中可溶的N4-Cytosine DNA甲基转移酶M.DraR1；同时还提供了该甲基转移酶的核苷酸序列和其克隆表达及分离纯化方法。本发明所提供的克隆表达及分离纯化方法可为其它DNA甲基转移酶或者限制性内切酶的开发应用提供方法学参考，对开发新型分子生物学的工具酶具有重要指导意义。

公开(公告)号：CN109486779B

公开(公告)日：2020-07-24

申请号：CN201811291824.3

申请日：2018-10-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  李胜杰 ,  王梁燕 ,  蔡建玲

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种DNA甲基转移酶及其可溶性异源表达和分离纯化方法。本发明首次从耐辐射奇球菌中分离纯化出具有DNA甲基转移酶活性并且在缓冲液中可溶的N4‑Cytosine DNA甲基转移酶M.DraR1；同时还提供了该甲基转移酶的核苷酸序列和其克隆表达及分离纯化方法。本发明所提供的克隆表达及分离纯化方法可为其它DNA甲基转移酶或者限制性内切酶的开发应用提供方法学参考，对开发新型分子生物学的工具酶具有重要指导意义。

公开(公告)号：CN109439636A

公开(公告)日：2019-03-08

申请号：CN201811290498.4

申请日：2018-10-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  李胜杰 ,  王梁燕 ,  蔡建玲 ,  华孝廷

IPC: C12N9/10

Abstract: 本发明公开了一种耐辐射奇球菌DNA甲基转移酶。所述DNA甲基转移酶来源于耐辐射奇球菌，其具有典型的DNA甲基转移酶保守结构域，从N端至C端依次为含“FxGxG”保守序列的AdoMet结合域、目标序列识别域（TRD序列）及含“TSPPY”保守序列的催化域，属α型N4-Cytosine DNA甲基转移酶；其所识别的底物DNA保守序列为5’-CCGCGG-3’，甲基化修饰的位置在第二个胞嘧啶C的N4位，产生4mC类型的修饰碱基；其甲基化反应的最适温度在25-37℃之间。本发明所涉及的DNA甲基转移酶能够特异性识别“CCGCGG”保守基序并甲基化修饰其第二个胞嘧啶C的N4位，产生4mC修饰碱基，为N4-Cytosine DNA甲基转移酶。

公开(公告)号：CN113637662A

公开(公告)日：2021-11-12

申请号：CN202110791706.4

申请日：2021-07-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  蔡建玲 ,  王梁燕 ,  潘超明

IPC: C12N9/52 ,  C12N15/70 ,  C12N15/57 ,  C12P21/06

Abstract: 本发明公开了一种耐高温的泛金属依赖性蛋白酶及其应用。所述蛋白酶具有Jab1/MPN(EXnHXHX7SX2D)保守结构域，其中X为任意一种必需氨基酸，其活性严格依赖于金属离子，但对金属离子类别选择性十分宽泛；其能识别类泛素化修饰位点并切割；酶切反应温度在4℃‑100℃均有活性，在30℃、37℃和100℃时均具有很强的活性。本发明中涉及的金属蛋白酶对金属离子的选择性宽泛，耐热性极佳，生产、保存和运输中不易失活，在基础研究和医药、化工、饲料行业中具有良好的应用价值。