公开(公告)号：CN107881221A

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201711487999.7

申请日：2017-12-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 菅复春 ,  刘珍珍 ,  胡苏辉 ,  宁晓东 ,  王荣军 ,  张龙现 ,  宁长申

IPC: C12Q1/6848 ,  C12Q1/6893

CPC classification number: Y02A50/451 ,  C12Q1/6848 ,  C12Q1/6893 ,  C12Q2549/119 ,  C12Q2537/165

Abstract: 本发明公开了一种基于Lectin 基因对部分隐孢子虫种类的分子鉴定方法，具体步骤如下：（1）基于SSU rRNA基因对待测样品进行巢式PCR扩增，测序比对，确定待测样品是否为隐孢子虫阳性，以及属于哪一种隐孢子虫种；（2）若待测样品属于C. parvum、C. hominis、C. cuniculus、horse genotype或驴源C. hominis中的一种，则基于Lectin基因对同种隐孢子虫不同分离株的待测样品进行巢式PCR扩增，测序比对，通过待测样品的Lectin基因位点上的连续的CAA三联密码子的个数确定待测样品是否为同种隐孢子虫不同分离株。本发明经序列比对及进化树结果表明，Lectin基因作隐孢子虫鉴定工具用于SSU rRNA 序列相近隐孢子虫种的鉴定有更好的区分度，可望为隐孢子虫的分子流行病学、群体遗传分析增添新的分子工具。

公开(公告)号：CN106119355A

公开(公告)日：2016-11-16

申请号：CN201610492725.6

申请日：2016-06-27

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王荣军 ,  张振杰 ,  张龙现 ,  张素梅 ,  王海燕 ,  菅复春 ,  宁长申 ,  胡苏辉

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

CPC classification number: Y02A50/451 ,  C12Q1/6893 ,  C12N15/1003 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2565/625 ,  C12Q2527/125

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于FTA卡检测粪便中隐孢子虫卵囊的方法。步骤如下：纯化收集隐孢子虫卵囊，计数稀释后，定量污染粪便后涂抹于FTA卡上备用；将阳性粪便样品涂抹于FTA卡上备用；用FTA卡收集新鲜粪便备用；在FTA卡上打孔，并洗脱FTA圆片；以清洗好的FTA卡片为DNA模板，以根据隐孢子虫18SrRNA设计的引物进行PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。本发明代替了传统商业化粪便DNA提取试剂盒提取DNA时繁琐的步骤和高昂的价格，具有成本低廉，方便快捷的优点。

公开(公告)号：CN107881221B

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201711487999.7

申请日：2017-12-29

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 菅复春 ,  刘珍珍 ,  胡苏辉 ,  宁晓东 ,  王荣军 ,  张龙现 ,  宁长申

IPC: C12Q1/6848 ,  C12Q1/6893

Abstract: 本发明公开了一种基于Lectin基因对部分隐孢子虫种类的分子鉴定方法，具体步骤如下：（1）基于SSU rRNA基因对待测样品进行巢式PCR扩增，测序比对，确定待测样品是否为隐孢子虫阳性，以及属于哪一种隐孢子虫种；（2）若待测样品属于C.parvum、C.hominis、C.cuniculus、horse genotype或驴源C.hominis中的一种，则基于Lectin基因对同种隐孢子虫不同分离株的待测样品进行巢式PCR扩增，测序比对，通过待测样品的Lectin基因位点上的连续的CAA三联密码子的个数确定待测样品是否为同种隐孢子虫不同分离株。本发明经序列比对及进化树结果表明，Lectin基因作隐孢子虫鉴定工具用于SSU rRNA序列相近隐孢子虫种的鉴定有更好的区分度，可望为隐孢子虫的分子流行病学、群体遗传分析增添新的分子工具。

公开(公告)号：CN105907751A

公开(公告)日：2016-08-31

申请号：CN201610509281.2

申请日：2016-06-27

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王荣军 ,  张振杰 ,  张龙现 ,  张素梅 ,  王海燕 ,  菅复春 ,  宁长申 ,  胡苏辉

IPC: C12N15/10

CPC classification number: C12N15/1006 ,  C12Q2523/308

Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及一种基于FTA卡提取DNA的方法，具体涉及一种基于FTA卡从粪便中提取隐孢子虫卵囊DNA的方法。提取步骤如下：收集经隐孢子虫卵囊感染成功后的犊牛粪便，获得隐孢子虫卵囊，定量污染粪便；将奶牛粪便涂抹于FTA卡上，常温晾干FTA卡，打孔获得FTA圆片；将获得的FTA圆片分别放入离心管内，去污并清洗，加入FTA卡清洗液，室温孵育后加入1×TE溶液，室温孵育，将清洗后的FTA圆片完全干燥，完成粪便中隐孢子虫卵囊DNA的提取。本发明只需携带FTA卡到养殖场采集粪便样本，经FTA洗脱液和其他有机溶液清洗后，可将FTA卡片用作DNA模板进行PCR扩增，成本低廉，方便快捷。