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公开(公告)号:CN111337670A
公开(公告)日:2020-06-26
申请号:CN202010219003.X
申请日:2020-03-25
Applicant: 河南农业大学
IPC: G01N33/569 , C12N15/31 , C12N15/70 , C07K14/315
Abstract: 本发明属于微生物检测领域,特别是指一种菌毛亚单位蛋白EbpA1猪源粪肠球菌抗体间接ELISA检测方法。利用纯化复性后的EbpA1亚单位蛋白初步建立了间接ELISA方法,采用棋盘法确定了最佳的包被浓度为2µg/mL;封闭液可以排除其他物质的非特异性吸附,我们选用1%的BSA进行封闭,达到了较好的效果;此外,对血清、酶标二抗的稀释比例和作用时间和底物的显色时间进行了摸索,均选择最佳的条件使建立的ELISA方法达到最优水平。ELISA结果的判定:在方法建立时采用P/N﹥2.1可视为阳性;而最终的结果采用阴性样品OD450值的平均数加3倍的标准差等于阳性的临界值。