公开(公告)号：CN109913566A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910312325.6

申请日：2019-04-18

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 宁长申 ,  彭永帅 ,  赵姗姗 ,  王坤轮 ,  宁晓冬 ,  闫亚群 ,  史柯 ,  菅复春 ,  张龙现 ,  王荣军 ,  张素梅

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种同时检测四种无浆体的多重PCR专用引物和四重PCR检测方法，牛无浆体专用引物扩增产物大小为529 bp，山羊无浆体专用引物扩增产物大小为874 bp，绵羊无浆体专用引物扩增产物大小为347 bp，嗜吞噬细胞无浆体专用引物扩增产物大小为172 bp。四重PCR反应体系为：LA Taq DNA Polymeras 0.25μL，10×LA Buffer 2.5μL，dNTP Mixture 4.0μL，四个引物对各0.4μL，DNA模板2.0μL，灭菌去离子水补足至25μL；四重PCR反应条件为：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，63℃退火30s，72℃延伸1 min，运行40个循环，72℃延伸10 min；该方法有着检测速度快，敏感性高，特异性强、高效、低成本等优点，适于四种病原所引起疾病的流行病学调查和临床确诊。