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公开(公告)号：CN103667064B
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201310429369.X
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用10～50mM EDTA溶液于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用高渗缓冲液与低渗缓冲液重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到99.2%以上。本发明细胞破碎工艺操作简便，设备要求低，易于放大生产，对大肠杆菌破碎率高，并且同时得到细胞内可溶性及不溶性成分。
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公开(公告)号：CN103667064A
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310429369.X
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用10～50mMEDTA溶液于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用高渗缓冲液与低渗缓冲液重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到99.2%以上。本发明细胞破碎工艺操作简便，设备要求低，易于放大生产，对大肠杆菌破碎率高，并且同时得到细胞内可溶性及不溶性成分。
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公开(公告)号：CN113138224A
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202110286852.1
申请日：2021-03-17
Applicant: 江苏大学
IPC: G01N27/447
Abstract: 本发明属于中药材分析及质量评价技术领域，具体涉及一种适用于发现僵蚕药材差异蛋白质的简便方法。本发明对不同僵蚕药材醇提蛋白质经蛋白质分级沉淀试剂丙酮分级处理后对各沉淀部分进行十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳，并对凝胶各对应沉淀部分的电泳结果进行比对分析，可发现不同僵蚕药材的差异蛋白质。本发明设计方法简便易行、无需特殊设备及试剂、分辨率高、结果准确度高，常规实验室即可操作，利用常规的十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳可发现不同僵蚕药材的差异蛋白质，适用于不同等级或不同产地的僵蚕药材研究，为其品质鉴定及优质优价提供分析依据。
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公开(公告)号：CN103467564B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201310431724.7
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种从大肠杆菌细胞中制备可溶性蛋白质及不溶性蛋白质的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用0.5%～5%TritonX-100于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用渗透压法重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到98.9%以上，本工艺中所得上清液为大肠杆菌细胞内可溶性蛋白质，所得沉淀为大肠杆菌细胞内不溶性蛋白质。本发明所述工艺操作简便易行，无特殊设备要求，易于放大规模，破碎率高。
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公开(公告)号：CN105087725B
公开(公告)日：2019-04-02
申请号：CN201510516845.0
申请日：2015-08-21
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种有效提高大肠杆菌中可溶性重组蛋白质表达水平的工艺方法，其步骤如下：将表达重组蛋白质的工程菌冻存液按0.1%比例接种到表达用新鲜LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜获得种子液，随后将种子液按照1%比例接种到表达用新鲜LB液体培养基中，37℃继续振荡培养至培养液OD600达到预设诱导起点的75%～90%，然后将培养温度升高至40℃继续培养0.5～1.5hr，待培养液OD600达预设诱导起点后，向培养液中添加诱导物，继续以37℃或者40℃振荡培养6hr，菌体内可以产生显著的可溶性重组蛋白质。本发明简便有效，成本低廉，易于放大，适用于生物工程及基因工程中用大肠杆菌表达各种可溶性异源重组蛋白质。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103160482B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310080459.2
申请日：2013-03-14
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法，步骤如下：在室温下收集鸡蛋清，并调节pH至5.5左右，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入分子量介于200-20000的聚乙二醇，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入饱和硫酸铵溶液，混匀后离心；分别收集离心得到的上层清液和下层清液；对上层清液进行超滤或者透析处理可以得到高纯度的鸡蛋清溶菌酶；对下层清液进行超滤或者透析处理可以得到卵白蛋白与卵转铁蛋白为主的较高纯度的其它活性蛋白。本发明简单易行，成本低廉，条件温和，可以很好地保持溶菌酶品质，适用于大规模工业化生产，同时还可以得到其它活性蛋白，进一步提高生产效益。
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公开(公告)号：CN103467564A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310431724.7
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种从大肠杆菌细胞中制备可溶性蛋白质及不溶性蛋白质的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用0.5%～5%TritonX-100于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用渗透压法重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到98.9%以上，本工艺中所得上清液为大肠杆菌细胞内可溶性蛋白质，所得沉淀为大肠杆菌细胞内不溶性蛋白质。本发明所述工艺操作简便易行，无特殊设备要求，易于放大规模，破碎率高。
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公开(公告)号：CN101475954A
公开(公告)日：2009-07-08
申请号：CN200810243646.7
申请日：2008-12-05
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌芽孢表面展示具有催化活性的脂肪酶的重组芽孢制备方法。该方法是利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与具有三酰甘油脂水解和转酯功能的脂肪酶基因重组后，构建融合表达的整合性重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示脂肪酶的重组芽孢。与本领域已知的方法相比，本发明方法将不同来源的具有三酰甘油脂水解功能的脂肪酶展示于Bacillus subtilis芽孢的表面，利用芽孢所具有的独特抗逆性，能提高脂肪酶的催化活性和稳定性。
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公开(公告)号：CN105801689A
公开(公告)日：2016-07-27
申请号：CN201610300962.8
申请日：2016-05-09
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种共制备卵白蛋白与卵铁传递蛋白的方法，涉及生物、医药及食品工业技术领域。步骤如下：室温下收集鸡蛋清，按照鸡蛋清与新鲜去离子水体积比为1：2的比例进行稀释，调节pH至5.0左右，均匀搅拌后离心；向离心所得上清液A中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，均匀搅拌后离心，收集沉淀B；溶解沉淀B后再向其中加入分子量介于200～20000的聚乙二醇，离心，收集上清液C及沉淀D。上清C中含有高纯度卵白蛋白，沉淀D中含有较高纯度卵铁传递蛋白。本发明简便快速，成本低廉，条件温和安全，适用于大规模工业化生产卵白蛋白与卵铁传递蛋白。
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公开(公告)号：CN105087725A
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201510516845.0
申请日：2015-08-21
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种有效提高大肠杆菌中可溶性重组蛋白质表达水平的工艺方法，其步骤如下：将表达重组蛋白质的工程菌冻存液按0.1%比例接种到表达用新鲜LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜获得种子液，随后将种子液按照1%比例接种到表达用新鲜LB液体培养基中，37℃继续振荡培养至培养液OD600达到预设诱导起点的75%～90%，然后将培养温度升高至40℃继续培养0.5～1.5hr，待培养液OD600达预设诱导起点后，向培养液中添加诱导物，继续以37℃或者40℃振荡培养6hr，菌体内可以产生显著的可溶性重组蛋白质。本发明简便有效，成本低廉，易于放大，适用于生物工程及基因工程中用大肠杆菌表达各种可溶性异源重组蛋白质。
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