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公开(公告)号：CN118909799A
公开(公告)日：2024-11-08
申请号：CN202411166277.1
申请日：2024-08-23
申请人： 江苏博扬生物制品有限公司 , 江南大学
IPC分类号： C12N1/15 , C12N15/80 , C12N15/90 , C12N15/55 , C12N15/56 , C12N9/82 , C12N9/34 , C12N1/38 , C12N1/14 , C12R1/685
摘要： 本发明公开了一种产L‑天冬酰胺酶的黑曲霉重组菌株及应用，属于基因工程技术领域。本发明对来源于Thermococcus zilligii的L‑天冬酰胺酶进行了密码子优化，并先后通过随机整合、优化整合位点、N端融合策略提高L‑天冬酰胺酶在黑曲霉中的表达量。本发明构建的在ammA位点整合TzI，并在TzI的N端融合糖化酶前500个氨基酸的黑曲霉重组菌株产酶能力相比对照提升3.64倍。本发明还通过优化培养基成分使产酶量进一步提升至486.74U/mL，有助于实现高温L‑天冬酰胺酶的工业化生产。
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公开(公告)号：CN113528491B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110952905.9
申请日：2021-08-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种N‑糖基化修饰提高黑曲霉木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程技术领域。通过酶学性质测定，突变体酶T59N的半衰期t1/250℃提高至340min，突变体酶A55N/D57S/T59N在50℃下孵育500min，酶活没有下降趋势，孵育1260min，酶活只损失25.6％。突变体酶A55N/D57S/T59N的比酶活为290.5U/mg，较xynA提高了70.4％，且在pH2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116004574A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202111232135.7
申请日：2021-10-22
申请人： 中国石油化工股份有限公司 , 中国石油化工股份有限公司大连石油化工研究院 , 江南大学
摘要： 本发明提供一种β‑1,4‑内切木聚糖酶突变体及其应用。所述β‑1,4‑内切木聚糖酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明首次揭示了C端对11家族的木聚糖酶热稳定性具有重要意义，通过氨基酸序列比对和科学设计，将两种嗜热菌(Thermopolyspora flexuosa和Nesterenkonia xinjiangensis)来源的木聚糖酶C端替换xynA的C端，显著提高了木聚糖酶的热稳定性。结果表明不仅N端对木聚糖酶的热稳定性有重要影响，C端的改造也具有重要借鉴意义。本发明还为11家族的木聚糖酶的热稳定机制的阐明和酶的蛋白工程改造奠定理论基础。
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公开(公告)号：CN113528491A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110952905.9
申请日：2021-08-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种N‑糖基化修饰提高黑曲霉木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程技术领域。通过酶学性质测定，突变体酶T59N的半衰期t1/250℃提高至340min，突变体酶A55N/D57S/T59N在50℃下孵育500min，酶活没有下降趋势，孵育1260min，酶活只损失25.6％。突变体酶A55N/D57S/T59N的比酶活为290.5U/mg，较xynA提高了70.4％，且在pH2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113528487A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110952917.1
申请日：2021-08-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程领域领域。本发明通过经过5轮筛选得到突变体A124P/A130N/T121V/T129L/I126V，最佳反应温度为60℃，较xynA上升10℃。野生型酶xynA的半衰期t1/250℃为18min，突变体在50℃下孵育1200min，酶活没有下降趋势。在55℃、60℃和下70℃孵育5min，仍然能保持76.8％、68.4％和35.5％的酶活力，且在pH 2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113528487B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110952917.1
申请日：2021-08-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程领域领域。本发明通过经过5轮筛选得到突变体A124P/A130N/T121V/T129L/I126V，最佳反应温度为60℃，较xynA上升10℃。野生型酶xynA的半衰期t1/250℃为18min，突变体在50℃下孵育1200min，酶活没有下降趋势。在55℃、60℃和下70℃孵育5min，仍然能保持76.8％、68.4％和35.5％的酶活力，且在pH 2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113528486A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110952906.3
申请日：2021-08-19
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种引入二硫键提高木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过对氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的木聚糖酶的第106位的缬氨酸突变为半胱氨酸和第156位的丙氨酸突变为半胱氨酸，或，第108位的丝氨酸突变为半胱氨酸和第129位的天冬酰胺突变为半胱氨酸，得到的突变体酶V106C/A156C、S108C/N152C在55℃孵育5min，相对酶活分别为85.6％和92.4％，比酶活为217U/mg和239U/mg，较野生型酶分别提高了27.3％和40.2％。在pH 2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有在饲料、食品等领域广泛使用的前景。
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