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公开(公告)号：CN105754885A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201610308645.0
申请日：2016-05-11
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法，属于基因工程领域。本发明成功实现了Sortase A在毕赤酵母中的高效分泌表达，解决了目前已有报道中该酶在大肠杆菌胞内表达中存在的产率较低、菌体需要破壁和菌株不稳定的问题。经过表达策略的筛选和发酵条件优化，胞外Sortase A的酶活和浓度分别可达131.9U/mL和97.8mg/L。本发明通过实现Sortase A的高效分泌表达，为该酶的工业化生产及其在蛋白质工程领域的应用打下了基础。
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公开(公告)号：CN107541482B
公开(公告)日：2020-07-07
申请号：CN201610465781.0
申请日：2016-06-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法，属于基因工程领域。本发明成功实现了SortaseA在大肠杆菌中的高效分泌表达，解决了目前已有报道中该酶无法分泌表达且胞内表达水平较低的问题。在摇瓶水平，所得SortaseA产量可达90.2mg/L，胞外酶活水平可达34.2U/mL；为后续SortaseA的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107541482A
公开(公告)日：2018-01-05
申请号：CN201610465781.0
申请日：2016-06-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种构建大肠杆菌高效分泌表达转肽酶SortaseA的方法，属于基因工程领域。本发明成功实现了SortaseA在大肠杆菌中的高效分泌表达，解决了目前已有报道中该酶无法分泌表达且胞内表达水平较低的问题。在摇瓶水平，所得SortaseA产量可达90.2mg/L，胞外酶活水平可达34.2U/mL；为后续SortaseA的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN107541504A
公开(公告)日：2018-01-05
申请号：CN201610465810.3
申请日：2016-06-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种应用转肽酶Sortase A修饰蛋白的方法，属于基因工程领域。本发明利用可以特异性吸附转肽酶Sortase A的磁珠，将Sortase A一步固定至磁珠上，用于催化蛋白或短肽连接、修饰反应。利用制备的Sortase A结合磁珠直接催化短肽与短肽之间的转肽连接反应、蛋白与Biotin、蛋白与树脂、短肽与蛋白之间的转肽连接反应等，相比游离酶，SortaseA结合磁珠后可至少循环使用5次，且维持大于游离酶催化效率的产率。
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公开(公告)号：CN105754885B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610308645.0
申请日：2016-05-11
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母高效分泌表达转肽酶Sortase A的方法，属于基因工程领域。本发明成功实现了Sortase A在毕赤酵母中的高效分泌表达，解决了目前已有报道中该酶在大肠杆菌胞内表达中存在的产率较低、菌体需要破壁和菌株不稳定的问题。经过表达策略的筛选和发酵条件优化，胞外Sortase A的酶活和浓度分别可达131.9U/mL和97.8mg/L。本发明通过实现Sortase A的高效分泌表达，为该酶的工业化生产及其在蛋白质工程领域的应用打下了基础。
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