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公开(公告)号：CN114480453A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210111489.4
申请日：2022-01-26
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/54 , C12N15/55 , C12N15/52 , C12N15/31 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P19/26 , A61K39/39 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种合成含有只有3条脂肪酸链的单磷酸类脂A的大肠杆菌，属于基因工程和生物工程领域。本发明敲除了大肠杆菌HW003基因组上编码次级酰基链转移酶基因lpxL、lpxP和lpxM。得到重组菌HWJ003，提供了一种相比野生型缺少1位磷酸、3位一级酰基链、2’位次级酰基链和3’位次级酰基链的类脂A结构简化的大肠杆菌。该类脂A结构提供了一种在大肠杆菌中鉴定革兰氏阴性菌类脂A次级酰基链转移酶基因功能的方法。
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公开(公告)号：CN113755515A
公开(公告)日：2021-12-07
申请号：CN202111151501.6
申请日：2021-09-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/04 , C12N15/31 , C12N15/54 , A23L33/125 , A61K31/715 , A61P39/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高效生产克拉酸的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程、发酵工程和材料科学领域。本发明通过编辑CA合成的关键基因，构建了过量生产CA的突变体；然后通过单因素和响应面法获得最优培养基，并对发酵罐中的发酵条件进行优化。采用本发明的方法制备得到的CA的产量达到19.79g/L，高于已知的最大产量(10.39g/L)，提高了90.47％。此外，对利用本发明的方法制备得到的CA进行了性质的表征，证明其具有优良的性质，如固体形态、分子量、空间结构、链构象、热学和流变学性质等。本发明中CA的高产为规模化生产和CA性质研究提供了夯实的基础，CA性质的揭示为CA的开发利用提供了坚实的理论基础。
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公开(公告)号：CN114606254B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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公开(公告)号：CN112680393B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202110053059.7
申请日：2021-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种能提高生产效率的无菌毛大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上菌毛基因簇的64个基因得到突变菌WQM026，该菌株在营养缺乏的培养基中生长变快，菌体总量增多。将PHB和L‑苏氨酸合成的相关基因分别转化到菌株WQM026中，得到的重组菌WQM026/pBHR68和WQM026/pFW01‑thrA*BC‑rhtC可以分别高效合成PHB和L‑苏氨酸。合成的PHB占细胞干重的87.87％，是野生型对照菌的3.44倍。L‑苏氨酸产量为2.49g/L，是野生型对照菌的3.66倍。
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公开(公告)号：CN113755515B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202111151501.6
申请日：2021-09-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/04 , C12N15/31 , C12N15/54 , A23L33/125 , A61K31/715 , A61P39/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高效生产克拉酸的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程、发酵工程和材料科学领域。本发明通过编辑CA合成的关键基因，构建了过量生产CA的突变体；然后通过单因素和响应面法获得最优培养基，并对发酵罐中的发酵条件进行优化。采用本发明的方法制备得到的CA的产量达到19.79g/L，高于已知的最大产量(10.39g/L)，提高了90.47％。此外，对利用本发明的方法制备得到的CA进行了性质的表征，证明其具有优良的性质，如固体形态、分子量、空间结构、链构象、热学和流变学性质等。本发明中CA的高产为规模化生产和CA性质研究提供了夯实的基础，CA性质的揭示为CA的开发利用提供了坚实的理论基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115747280A
公开(公告)日：2023-03-07
申请号：CN202211441483.X
申请日：2022-11-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/26
Abstract: 一种副溶血弧菌类脂A提取纯化与结构分析的方法。本发明属于类脂A提取领域。本发明的目的是为了解决现有类脂A提取方法不适用于副溶血弧菌以及有机试剂用量大的技术问题。本发明的方法是针对特定的副溶血弧菌开发的游离与非游离类脂A的提取与提纯方法，提取LPS连接类脂A时，加入醋酸钠水解时将pH值调节到2.0‑2.5，与此同时，将磁力搅拌时间增长为2.5h，从而实现了副溶血弧菌LPS连接类脂A的高效提取，此外，提取副溶血弧菌游离类脂A时，本申请创新性的采用极少量的菌体以及少于传统方法约100倍有机试剂(氯仿、甲醇)的量进行副溶血弧菌的游离类脂A的提取，是一种较新且省时省力的提取菌株中游离类脂A的方法。
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公开(公告)号：CN114480453B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202210111489.4
申请日：2022-01-26
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/54 , C12N15/55 , C12N15/52 , C12N15/31 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P19/26 , A61K39/39 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种合成含有只有3条脂肪酸链的单磷酸类脂A的大肠杆菌，属于基因工程和生物工程领域。本发明敲除了大肠杆菌HW003基因组上编码次级酰基链转移酶基因lpxL、lpxP和lpxM。得到重组菌HWJ003，提供了一种相比野生型缺少1位磷酸、3位一级酰基链、2’位次级酰基链和3’位次级酰基链的类脂A结构简化的大肠杆菌。该类脂A结构提供了一种在大肠杆菌中鉴定革兰氏阴性菌类脂A次级酰基链转移酶基因功能的方法。
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公开(公告)号：CN114606254A
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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公开(公告)号：CN113106049A
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202110455218.6
申请日：2021-04-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种不合成肠杆菌共同抗原和鞭毛的基因工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌中敲除大肠杆菌基因组上ECA和鞭毛基因簇的62个基因得到突变菌WQM021，WQM022菌株在营养缺乏(M9)培养基中生长变快，菌体总量增多。采用本发明的方法，WQM022/pBHR68的DCW，PHB浓度和转化效率进一步提高，分别达到3.03g/L，78.95％，15.78％；重组菌株WQM022/pFW01‑thrA*BC‑rhtC；该菌株每小时L‑苏氨酸产量，葡萄糖转化效率和L‑苏氨酸产量分别达到1.83g/L，11.42％，0.63g/h。
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公开(公告)号：CN112680393A
公开(公告)日：2021-04-20
申请号：CN202110053059.7
申请日：2021-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种能提高生产效率的无菌毛大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上菌毛基因簇的64个基因得到突变菌WQM026，该菌株在营养缺乏的培养基中生长变快，菌体总量增多。将PHB和L‑苏氨酸合成的相关基因分别转化到菌株WQM026中，得到的重组菌WQM026/pBHR68和WQM026/pFW01‑thrA*BC‑rhtC可以分别高效合成PHB和L‑苏氨酸。合成的PHB占细胞干重的87.87％，是野生型对照菌的3.44倍。L‑苏氨酸产量为2.49g/L，是野生型对照菌的3.66倍。
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