公开(公告)号：CN118421548A

公开(公告)日：2024-08-02

申请号：CN202410607276.X

申请日：2024-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  张康 ,  吕慧慧

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/88 ,  C12N15/53 ,  C12N15/75 ,  C12P13/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种食品级高效生产γ‑氨基丁酸的重组菌株的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了一种重组枯草芽孢杆菌，且利用该菌株可高效催化底物生产GABA，所述枯草芽孢杆菌是在菌株WS9C6D‑GAD的基础上进行启动子优化以及高通量筛选影响GAD表达的相关基因，最终获得优势菌株，并进一步摇瓶发酵优化，对优势菌株进行3‑L罐高密度发酵，成功实现GAD的高效食品级表达，酶活可达到319.62U·mL‑1，并优化其催化生产GABA的反应条件，以高效制备GABA，产量可达481.62g·L‑1，摩尔转化率为100％，产率为48.16g·L‑1·h‑1，为目前GABA生产的最高产率。

公开(公告)号：CN117965411A

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202410040503.5

申请日：2024-01-11

Applicant: 江南大学

Inventor： 张康 ,  吴敬 ,  吕慧慧 ,  于心蕊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/60 ,  C12P13/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种无抗性标记基因组整合和游离质粒共表达外源基因的枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用Cre/lox基因编辑系统依次叠加整合谷氨酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌WS9C的nprE、aprE、nprB、srfA、mpr和bpr位点上，并进一步失活了丙氨酸消旋酶基因dal，再向其中转入质粒pUB110‑gadA，获得了重组菌株WS9C6D‑GAD。实现了外源基因通过基因组整合和游离质粒共表达的方式在枯草芽孢杆菌中的食品级表达。在无抗生素添加的条件下，重组菌株WS9C6D‑GAD在3L罐高密度发酵培养68h的GAD活性达到199.49U/mL。