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公开(公告)号：CN117965411A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410040503.5
申请日：2024-01-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种无抗性标记基因组整合和游离质粒共表达外源基因的枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用Cre/lox基因编辑系统依次叠加整合谷氨酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌WS9C的nprE、aprE、nprB、srfA、mpr和bpr位点上，并进一步失活了丙氨酸消旋酶基因dal，再向其中转入质粒pUB110‑gadA，获得了重组菌株WS9C6D‑GAD。实现了外源基因通过基因组整合和游离质粒共表达的方式在枯草芽孢杆菌中的食品级表达。在无抗生素添加的条件下，重组菌株WS9C6D‑GAD在3L罐高密度发酵培养68h的GAD活性达到199.49U/mL。
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公开(公告)号：CN119955837A
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202510098394.7
申请日：2025-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基因组整合型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用Cre/lox基因编辑系统将麦芽糖淀粉酶amyM基因依次整合到枯草芽孢杆菌WS9C基因组的7个不同位点，构建了枯草芽孢杆菌WS9C7。以枯草芽孢杆菌WS9C7为表达宿主，过表达群体感应调节因子ComA，构建了枯草芽孢杆菌WS9C7C。在无抗生素添加的条件下，构建的基因工程菌摇瓶发酵60h时AmyM酶活可达到652U/mL～848U/mL，在3‑L罐发酵AmyM酶活可达6988U/mL～10847U/mL，具有良好的工业化应用潜力。
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公开(公告)号：CN114107146B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111306449.7
申请日：2021-11-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种无抗性标记营养缺陷型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除了枯草芽孢杆菌WS9的丙氨酸消旋酶基因dal，构建了D‑丙氨酸营养缺陷型枯草芽孢杆菌WS9DAL。以枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌WS9DAL为表达宿主，构建了三株表达麦芽糖淀粉酶的基因工程菌WS9DAL1，WS9DAL2和WS9DAL3。在无抗生素添加的条件下，对三株基因工程菌进行摇瓶发酵培养，发酵培养60h时MAase酶活分别达到714U/mL，519U/mL和892U/mL。
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公开(公告)号：CN114107146A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111306449.7
申请日：2021-11-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种无抗性标记营养缺陷型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除了枯草芽孢杆菌WS9的丙氨酸消旋酶基因dal，构建了D‑丙氨酸营养缺陷型枯草芽孢杆菌WS9DAL。以枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌WS9DAL为表达宿主，构建了三株表达麦芽糖淀粉酶的基因工程菌WS9DAL1，WS9DAL2和WS9DAL3。在无抗生素添加的条件下，对三株基因工程菌进行摇瓶发酵培养，发酵培养60h时MAase酶活分别达到714U/mL，519U/mL和892U/mL。
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