公开(公告)号：CN104962571A

公开(公告)日：2015-10-07

申请号：CN201510364026.9

申请日：2015-06-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘文茂 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N11/04 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种固定化马来酸顺反异构酶及其制备方法与应用，属于酶学与酶工程技术领域与生物化工领域。本发明将R5肽段连接在马来酸顺反异构酶的N端，再将R5-MaiA用戊二醛交联，最后用硅反应液将交联后的R5-MaiA进行包埋，完成马来酸顺反异构酶的固定化。用成本低、易操作的方法获得了稳定性高的固定化马来酸顺反异构酶(R5-MI-CLEA-Si)，固定化酶最适反应温度为55℃，最适反应pH为7.7；在55℃条件下固定化酶的半衰期为4h，游离酶的半衰期为0.5h，固定化酶的稳定性是游离酶的8倍，重复催化反应8次后固定化酶的酶活仍能保留75％。

公开(公告)号：CN106222122A

公开(公告)日：2016-12-14

申请号：CN201610575998.7

申请日：2016-07-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘文茂 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12P7/46 ,  C12R1/19 ,  C12N9/88 ,  C12N9/90 ,  C12Y402/01002 ,  C12Y502/01001

Abstract: 本发明涉及一种可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，通过敲除大肠杆菌的延胡索酸酶编码基因fumA和fumC，并转化来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶基因得到。本发明还公开了上述大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法：发酵培养大肠杆菌工程菌，当OD600达到40-80时对大肠杆菌工程菌进行高密度诱导表达，将得到的发酵液生化催化马来酸，得到富马酸。本发明利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌中的fumA和fumC基因，切断其富马酸到L-苹果酸的代谢通路，然后表达来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶，获得的基因工程菌株可高效转化马来酸底物合成高纯度富马酸，几乎不合成L-苹果酸副产物，为全细胞法催化马来酸生产富马酸的工业化提供依据。

公开(公告)号：CN104962571B

公开(公告)日：2018-08-21

申请号：CN201510364026.9

申请日：2015-06-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  刘文茂 ,  周丽 ,  崔文璟 ,  刘中美

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N11/04 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种固定化马来酸顺反异构酶及其制备方法与应用，属于酶学与酶工程技术领域与生物化工领域。本发明将R5肽段连接在马来酸顺反异构酶的N端，再将R5‑MaiA用戊二醛交联，最后用硅反应液将交联后的R5‑MaiA进行包埋，完成马来酸顺反异构酶的固定化。用成本低、易操作的方法获得了稳定性高的固定化马来酸顺反异构酶(R5‑MI‑CLEA‑Si)，固定化酶最适反应温度为55℃，最适反应pH为7.7；在55℃条件下固定化酶的半衰期为4h，游离酶的半衰期为0.5h，固定化酶的稳定性是游离酶的8倍，重复催化反应8次后固定化酶的酶活仍能保留75％。