公开(公告)号：CN118345061B

公开(公告)日：2024-10-01

申请号：CN202410598431.6

申请日：2024-05-15

Applicant: 武汉大学中南医院

Inventor： 刘银 ,  王鑫杰 ,  周芙玲 ,  刘悦 ,  曹锐 ,  黎鑫琦 ,  潘瑞扬

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种AsCpf1突变体蛋白及NPM1基因突变检测试剂盒，属于生物技术领域。AsCpf1突变体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其具有在其他突变体蛋白中未报道过的PAM特性(NNCV和TTTV偏好性)，其宽广的PAM识别范围而易于对任何基因位点设计crRNA，扩展了其应用范围。NPM1基因突变检测试剂盒包含：针对NPM1基因c.863_864四碱基插入突变位点的ERA引物、针对NPM1基因c.863_864四碱基插入突变的crRNA，AsCpf1突变体蛋白，单链DNA荧光报告分子；该试剂盒可仅使用一种crRNA检测NPM1基因c.863_864四碱基插入的各种突变亚型。

公开(公告)号：CN113584167A

公开(公告)日：2021-11-02

申请号：CN202110765354.5

申请日：2021-07-07

Applicant: 武汉大学中南医院

Inventor： 刘银 ,  周芙玲 ,  王鑫杰 ,  灿灿

IPC: C12Q1/6886 ,  C12N15/113 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明提供了一种用于检测FLT3‑F691L突变的crRNA、等温扩增引物和试剂盒，所述crDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测FLT3‑F691L突变的等温扩增引物，包括如SEQ ID NO.13所示的上游引物和如SEQ ID NO.16所示的下游引物；所述试剂盒含有所述crDNA或者所述的crRNA、以及Cas12a蛋白、荧光探针和所述等温扩增引物。本发明首次采用CRISPR荧光法检测FLT3基因F691L突变，具有成本低、可多次重复检测、方法简单、检测速度快、灵敏(最低检测极限达到10拷贝/uL)、特异形的特点。

公开(公告)号：CN119144722A

公开(公告)日：2024-12-17

申请号：CN202411501073.9

申请日：2024-10-25

Applicant: 武汉大学中南医院

Inventor： 周芙玲 ,  刘悦 ,  刘银

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种DNMT3A基因突变检测试剂盒和检测方法，属于基因检测领域。本发明试剂盒包含序列如SEQ ID NO.5、10所示的针对DNMT3A基因R882位点的ERA引物、靶向R882H/C突变的crRNA、Cas12a蛋白和单链DNA荧光报告分子，还可进一步包含AciI限制酶、ERA试剂、DNMT3A基因R882位点突变阳性标准品。本发明通过ERA的高效扩增和AciI内切酶的切割，将ERA等温扩增与限制酶切同步化，产生大量R882突变富集的扩增产物，扩增产物通过CRISPR/Cas12a进一步提高了传感性能，从而使本发明具有准确性好、灵敏度高、选择性强、抗干扰能力强、重复性好等优点。

公开(公告)号：CN118345061A

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202410598431.6

申请日：2024-05-15

Applicant: 武汉大学中南医院

Inventor： 刘银 ,  王鑫杰 ,  周芙玲 ,  刘悦 ,  曹锐 ,  黎鑫琦 ,  潘瑞扬

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种AsCpf1突变体蛋白及NPM1基因突变检测试剂盒，属于生物技术领域。AsCpf1突变体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其具有在其他突变体蛋白中未报道过的PAM特性(NNCV和TTTV偏好性)，其宽广的PAM识别范围而易于对任何基因位点设计crRNA，扩展了其应用范围。NPM1基因突变检测试剂盒包含：针对NPM1基因c.863_864四碱基插入突变位点的ERA引物、针对NPM1基因c.863_864四碱基插入突变的crRNA，AsCpf1突变体蛋白，单链DNA荧光报告分子；该试剂盒可仅使用一种crRNA检测NPM1基因c.863_864四碱基插入的各种突变亚型。

公开(公告)号：CN113584167B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202110765354.5

申请日：2021-07-07

Applicant: 武汉大学中南医院

Inventor： 刘银 ,  周芙玲 ,  王鑫杰 ,  灿灿

IPC: C12Q1/6886 ,  C12N15/113 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明提供了一种用于检测FLT3‑F691L突变的crRNA、等温扩增引物和试剂盒，所述crDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测FLT3‑F691L突变的等温扩增引物，包括如SEQ ID NO.13所示的上游引物和如SEQ ID NO.16所示的下游引物；所述试剂盒含有所述crDNA或者所述的crRNA、以及Cas12a蛋白、荧光探针和所述等温扩增引物。本发明首次采用CRISPR荧光法检测FLT3基因F691L突变，具有成本低、可多次重复检测、方法简单、检测速度快、灵敏(最低检测极限达到10拷贝/uL)、特异形的特点。