一种新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒

    公开(公告)号:CN102455360A

    公开(公告)日:2012-05-16

    申请号:CN201010512487.3

    申请日:2010-10-20

    Abstract: 本发明提供的一种新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,根据GenBank中的新孢子虫NcSRS2基因序列设计一对引物,引入酶切位点,截去NcSRS2蛋白的信号肽区,从新疆地方奶牛阳性血清中提取DNA;通过PCR扩增了长约975bp的tNcSRS2基因片段,克隆到pMD-18-T载体上,酶切并测序鉴定;然后将目的片段进一步定向连接到pGEX-4T-2表达载体,转化到大肠杆菌中,诱导表达、纯化;表达融合蛋白的分子量约为62kDa;用于ELISA包被抗原,获取rELISA抗体检测试剂盒;其使用步骤:将包被好的酶标反应板取出,经洗涤、封闭、再洗涤,加检测样品;再经第三次洗涤,加二抗;经第四次洗涤,显色、终止反应;读板OD450/630值,判定结果;与其商品化ELISA检测盒比符合率均达到95%以上。本检测盒也适用于反刍动物血清和血浆中的犬新孢子虫抗体的酶联免疫检测。

    一种新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒

    公开(公告)号:CN102455360B

    公开(公告)日:2014-06-18

    申请号:CN201010512487.3

    申请日:2010-10-20

    Abstract: 本发明提供的一种新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,根据GenBank中的新孢子虫NcSRS2基因序列设计一对引物,引入酶切位点,截去NcSRS2蛋白的信号肽区,从新疆地方奶牛阳性血清中提取DNA;通过PCR扩增了长约975bp的tNcSRS2基因片段,克隆到pMD-18-T载体上,酶切并测序鉴定;然后将目的片段进一步定向连接到pGEX-4T-2表达载体,转化到大肠杆菌中,诱导表达、纯化;表达融合蛋白的分子量约为62kDa;用于ELISA包被抗原,获取rELISA抗体检测试剂盒;其使用步骤:将包被好的酶标反应板取出,经洗涤、封闭、再洗涤,加检测样品;再经第三次洗涤,加二抗;经第四次洗涤,显色、终止反应;读板OD450/630值,判定结果;与其商品化ELISA检测盒比符合率均达到95%以上。本检测盒也适用于反刍动物血清和血浆中的犬新孢子虫抗体的酶联免疫检测。

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