公开(公告)号：CN106995486A

公开(公告)日：2017-08-01

申请号：CN201710248360.7

申请日：2017-04-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  季星妤 ,  施洋洋 ,  韦芊含

IPC: C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C07K16/08 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种GyV8新型环形病毒VP3可溶性蛋白的制备方法。该方法是用pGEX‑6p‑1线性化载体以及GyV8病毒VP3基因片段的引物，利用重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆VP3，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现GyV8的VP3蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的VP3可溶性蛋白。本发明不依赖于酶切位点及限制性内切酶的重组酶ExnaseTM II体外重组技术克隆GyV8病毒VP3基因，简化克隆过程，实现VP3基因快速克隆表达。

公开(公告)号：CN106565829A

公开(公告)日：2017-04-19

申请号：CN201610937115.2

申请日：2016-11-01

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  刘敏 ,  姚晓慧 ,  季星妤 ,  韦芊含 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  田晓彦 ,  万志敏

IPC: C07K14/01 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C07K14/005 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/10022 ,  C12N2800/101

Abstract: 本发明还提供了一种GyV9环形病毒VP3蛋白制备方法，该方法基于重组酶ExnaseTM II将线性化的pGEX‑6p‑1载体与GyV9病毒VP3基因片段PCR产物不经酶切连接反应，直接重组克隆技术；并转化到大肠杆菌，实现VP3蛋白表达；其中，PCR扩增所述的GyV9病毒VP3基因片段时所用引物的核苷酸序列如下：上游引物1：5’‑GTTCCAGGGGCCCATGGATGCGACGGGCAC‑3’；下游引物1：5’‑GTTTTCACCGTCATTACAATCTTGCGCCTT‑3’。该方法简化克隆过程，可快速构建GyV9病毒VP3基因的原核表达载体，实现VP3基因快速克隆表达。本发明获得的GyV9病毒VP3表达及纯化的蛋白，可直接提供VP3蛋白作为GyV9诊断抗原；作为免疫原获得抗VP3多克隆抗体；为开展GyV9流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究VP3生物学功能具有重要意义。