一种黄色黏球菌大片段敲除质粒及其敲除方法

    公开(公告)号:CN114032248B

    公开(公告)日:2023-11-07

    申请号:CN202111289676.3

    申请日:2021-11-02

    Abstract: 本发明公开了一种黄色黏球菌大片段敲除质粒及其敲除方法。将pilA基因的启动子片段PpilA和sacB基因的ORF片段融合获得PpilA‑SacB的模块,扩增出四环素抗性基因,获得Ptet‑TCR模块,将PpilA‑SacB模块和Ptet‑TCR模块构建到pBJ113载体的BamHI和XbaI位点,获得质粒pBJ116。本发明的质粒pBJ116,其含有卡那霉素正向筛选标记、半乳糖负向筛选标记、四环素正向筛选和蔗糖负向筛选模块,通过两次正负筛选系统,实现黄色黏球菌基因组上大片段的敲除。经试验发现,本发明的方法获得的Myxochelin A编码基因ΔMXAN_3618突变体产生铁载体的水平显著降低,并且捕食铜绿假单胞菌的能力显著降低。并且该方法所需的时间较短。

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