一种获得丛枝菌根真菌根外菌丝的方法及其应用

    公开(公告)号:CN119144462A

    公开(公告)日:2024-12-17

    申请号:CN202411446447.1

    申请日:2024-10-16

    Abstract: 本发明公开了一种获得丛枝菌根真菌根外菌丝的方法及其应用,所述方法包括以下步骤:S1.用浸泡液充分浸泡存在丛枝菌根(Arbuscular mycorrhiza,AM)共生的植物根系及根系生长范围内的土壤,收集浸泡物,之后将浸泡物、固体颗粒和浸泡液混合均匀,得到混合物;所述浸泡液为含吐温20的冰水混合物;S2.对步骤S1所得混合物进行固液分离,用筛网过滤所得泥浆,收集未过网的分离物;S3.用冰水充分浸泡所得分离物,收集缠绕固体颗粒的絮状物,即得。所述方法在普通实验室条件下不需借助显微镜即可实现AM真菌根外菌丝的快速分离和收集,操作简易,效率高,获得的AM真菌根外菌丝具有高侵染活性,避免传统方法为收集真菌孢子而浪费活体菌丝的情况,节约资源,可行性高。

    采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法

    公开(公告)号:CN108504726B

    公开(公告)日:2021-10-26

    申请号:CN201810264938.2

    申请日:2018-03-28

    Inventor: 胡文涛 唐明 陈辉

    Abstract: 本发明采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法,是通过湿筛倾析AMF孢子;剪出小方片放置在无菌滤纸上;在小方片上扎出小坑;挑取未开裂的AMF孢子放在小坑内;用微量注射器针头压碎孢子并注射无菌甘油清洗掉残留在针头上的单个孢子内含物;将带有AMF单个孢子破碎物与甘油的小方片放入PCR管底部,再加入PCR所需要的正反引物、Taq酶和PCR级别的无菌水,快速离心,即可进行PCR。无菌甘油快捷地清洗可能沾有AMF单个孢子内含物的针头,加之甘油又能提高微量DNA的PCR扩增效率,将AMF单个孢子DNA等内含物暴露在无菌小方片上,可直接将其放入PCR管底部,与PCR的其他反应液接触,进行PCR反应。所涉及的装置易获得,可重复利用,操作简单,可行性高,成本低廉。

    异形根孢囊霉菌根共生早期标记基因及其应用

    公开(公告)号:CN113528697A

    公开(公告)日:2021-10-22

    申请号:CN202110785269.5

    申请日:2021-07-12

    Abstract: 本发明公开异形根孢囊霉菌根共生早期标记基因及其应用。本发明通过同源序列搜索和保守结构域分析方法,在异形根孢囊霉基因组中发现了参与营养信号通路的10个基因,包括Cyr1、Pde2、Bcy1、Tpk1、Snf1、Tor2、Tip41、Atg8、Ssa3和Msn2基因。通过实时荧光定量PCR方法,检测到上述基因在共生早期大量表达,表明上述基因可作为共生早期标记基因;且表达量高、灵敏度高,分析所需的样品量较少、工作量较小,不但有利于提前评判常规的菌根植物种苗能否实现菌根化及潜在的菌根化水平,还能在一定程度上提高检测灵敏度并减少工作量,从而为农林业菌根化种苗的规模化生产和推广应用提供便利。

    连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法

    公开(公告)号:CN110476713A

    公开(公告)日:2019-11-22

    申请号:CN201910914690.4

    申请日:2019-09-26

    Abstract: 本发明可连续收集丛枝菌根真菌菌丝装置及方法,是在培养箱内装置菌根室与菌丝室,在对应处倒置种植植物,添加丛枝菌根真菌菌剂于无菌苗根系,添加菌根室下基质与上基质并间隔向菌根室内浇灌低磷营养液,向菌丝室内浇灌高磷营养液,菌丝可以穿过菌丝入口进入菌丝室内大量繁殖,更好地向植物提供磷营养以换取所需的碳源,过六十天后将菌丝室从培养箱内取出收集菌丝,然后再依次将菌丝室下基质与菌丝室上基质填充到菌丝室内培养菌丝,由于本发明利用了根系的向重力性以及菌丝的无向重力性,加之菌丝吸磷的特性,完全能够达到可连续收集到大量丛枝菌根真菌菌丝的目的,操作简单,装置可重复利用,可行性高。

    华山松大小蠹人工辅助交配饲养方法

    公开(公告)号:CN109287574A

    公开(公告)日:2019-02-01

    申请号:CN201811373420.9

    申请日:2018-11-19

    Abstract: 本发明是在华山松木段侧面钻孔至木质部,插入花盆沙土中;将华山松大小蠹雌虫放入透明胶囊中并嵌入木段钻筑的孔内,将花盆置于暗室中;观察确定雌虫侵入华山松木段后将透明胶囊取出,将放入雄虫的透明胶囊嵌入孔内;观察确定雄虫全部侵入后,将花盆移出暗室培养,浇水保持树皮湿润,直至第二代华山松大小蠹羽化扬飞。本发明解决了华山松大小蠹室内传代饲养困难的问题,能无间断的为华山松大小蠹的防治研究提供虫源,缩短了科研周期,本发明人工传代判定雌雄虫交配成功30天后,子坑道中的第二代华山松大小蠹多处于不同龄期的幼虫期,交配成功75天后逐步有成虫扬飞,雌雄交配成功率为75%。

    防治大小蠹注干药剂及制备方法

    公开(公告)号:CN109156473A

    公开(公告)日:2019-01-08

    申请号:CN201811328764.8

    申请日:2018-11-09

    Abstract: 本发明防治大小蠹注干药剂由以下组分及重量份配比混合搅拌而成:马鞭草烯酮3~5,吡虫啉12~17、氧化乐果2~5,乳化剂1~8,增效剂1~5,溶剂55~70;是一种无公害药剂,无毒无污染,化学性质稳定,对人畜和环境安全,具有很强的内吸杀虫作用,可以被茎、叶吸进植株体内,并可传送到未喷到部位,使大小蠹中毒死亡,混合药剂的效果明显高于单个药剂的使用效果;利用其防治大小蠹注干具有非常理想的环境相容性,避免了对环境的污染以及地理环境对防治效果的影响,对大小蠹具有明显的趋避效果,既可以对受害树木上的大小蠹进行趋避,还可以防止大小蠹对健康华山松的入侵。

    一种利用豆科植物根系分泌物诱导AM真菌离体产生菌丝体和次生孢子的培养方法

    公开(公告)号:CN116640672B

    公开(公告)日:2024-04-12

    申请号:CN202310623580.9

    申请日:2023-05-30

    Abstract: 本发明公开一种利用豆科植物根系分泌物诱导AM真菌离体产生菌丝体和次生孢子的培养方法。本发明的“多层三明治”夹膜培养体系能有效隔绝异形根孢囊霉孢子侵染紫云英根系,在离体条件下,异形根孢囊霉能摄取根系分泌物并促进其菌丝生长和次生孢子形成。同时,模拟根系分泌物成分营养液能诱导异形根孢囊霉在离体条件下产次生孢子。可见,本发明的方法能在离体条件下扩繁AM真菌,而不需要侵染宿主植物根系,扩繁效率高且能分离纯净孢子便于科学研究,还有操作简单和周期短等优点;因此,利用该方法能实现准确鉴定野生AM真菌的形态特征及菌种分类,扩展丛枝菌根真菌种质资源库,为丛枝菌根真菌的基础与应用研究提供更简便和可行的扩繁方法。

    巨桉二肽转运蛋白质编码基因EgNPF8.1的应用

    公开(公告)号:CN117683105A

    公开(公告)日:2024-03-12

    申请号:CN202311623690.1

    申请日:2023-11-30

    Abstract: 本发明公开一种巨桉二肽转运蛋白质编码基因EgNPF8.1的应用,属于植物基因工程和生物技术领域。本发明提供的EgNPF8.1基因功能参与了丛枝菌根真菌的侵染和菌根共生体发育过程,基因转录水平分析表明EgNPF8.1受AM真菌异形根孢囊霉侵染的显著诱导表达。通过对巨桉基因EgNPF8.1的功能研究,结果表明该基因编码一个二肽转运子,并在巨桉丛枝菌根氮与磷吸收途径中发挥着重要作用,该基因的沉默对巨桉丛枝菌根氮与磷吸收途径具有显著的影响,可用于菌根林木的遗传改良。还通过添加不同氮和磷浓度的营养液,观察丛枝菌根真菌的侵染率、侵染强度和丛枝丰度,低磷加氮条件下,显著促进巨桉丛枝菌根的形成与发育。

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