公开(公告)号：CN116355974B

公开(公告)日：2023-08-18

申请号：CN202310283723.6

申请日：2023-03-22

Applicant: 山东金城医药研究院有限公司 ,  山东理工大学

Inventor： 马钦元 ,  郑庚修 ,  张祥鹤 ,  高秀珍 ,  王宾 ,  王辉 ,  崔希礼 ,  朱晓刚

IPC: C12P17/04 ,  C07D307/54

Abstract: 本发明属于呋喃铵盐制备的技术领域，具体涉及一种酶‑化学法合成呋喃铵盐的生产工艺。本发明提供了一种新型的、双酶催化的呋喃铵盐绿色合成工艺，该工艺以廉价易得的糠醛和甲醛为原料，经ThDP依赖型脱羧酶高效催化生成2‑呋喃基羟甲基酮，2‑呋喃基羟甲基酮之后被氧化酶氧化为呋喃酮酸，最后呋喃酮酸再经过化学法合成呋喃铵盐。本发明提供的呋喃铵盐绿色合成工艺，涉及到的双酶催化步骤可无缝集成到当前传统的化学合成工艺中，取代污染、耗能最为严重的步骤，极大地缩短了呋喃铵盐的制备反应路线，具有起始原料易获得、低成本、高效、环保、节能等多方面优势，有利于实现工业化生产。

公开(公告)号：CN116355974A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202310283723.6

申请日：2023-03-22

Applicant: 山东金城医药研究院有限公司 ,  山东理工大学

Inventor： 马钦元 ,  郑庚修 ,  张祥鹤 ,  高秀珍 ,  王宾 ,  王辉 ,  崔希礼 ,  朱晓刚

IPC: C12P17/04 ,  C07D307/54

Abstract: 本发明属于呋喃铵盐制备的技术领域，具体涉及一种酶‑化学法合成呋喃铵盐的生产工艺。本发明提供了一种新型的、双酶催化的呋喃铵盐绿色合成工艺，该工艺以廉价易得的糠醛和甲醛为原料，经ThDP依赖型脱羧酶高效催化生成2‑呋喃基羟甲基酮，2‑呋喃基羟甲基酮之后被氧化酶氧化为呋喃酮酸，最后呋喃酮酸再经过化学法合成呋喃铵盐。本发明提供的呋喃铵盐绿色合成工艺，涉及到的双酶催化步骤可无缝集成到当前传统的化学合成工艺中，取代污染、耗能最为严重的步骤，极大地缩短了呋喃铵盐的制备反应路线，具有起始原料易获得、低成本、高效、环保、节能等多方面优势，有利于实现工业化生产。

公开(公告)号：CN114591938B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202210361140.6

申请日：2022-04-07

Applicant: 山东金城医药研究院有限公司

Inventor： 马钦元 ,  崔希礼 ,  朱晓刚 ,  沈剑 ,  王宾 ,  付凯

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P17/04

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种羧化酶突变体及其制备方法和应用。羧化酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:3是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第492位氨基酸由Val突变为Pro得到。本发明的羧化酶突变体实现了以糠醛和甲醛为原料生产呋喃铵盐前体物质1‑(2‑呋喃基)‑2‑羟基乙酮的高效催化，显著降低了呋喃铵盐的生产成本，产物1‑(2‑呋喃基)‑2‑羟基乙酮的纯度大大提高。

公开(公告)号：CN114591938A

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN202210361140.6

申请日：2022-04-07

Applicant: 山东金城医药研究院有限公司

Inventor： 马钦元 ,  崔希礼 ,  朱晓刚 ,  沈剑 ,  王宾 ,  付凯

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P17/04

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种羧化酶突变体及其制备方法和应用。羧化酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:3是SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第492位氨基酸由Val突变为Pro得到。本发明的羧化酶突变体实现了以糠醛和甲醛为原料生产呋喃铵盐前体物质1‑(2‑呋喃基)‑2‑羟基乙酮的高效催化，显著降低了呋喃铵盐的生产成本，产物1‑(2‑呋喃基)‑2‑羟基乙酮的纯度大大提高。

公开(公告)号：CN116790466B

公开(公告)日：2023-11-03

申请号：CN202310882430.X

申请日：2023-07-19

Applicant: 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

Inventor： 杨绍梅 ,  马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  崔希礼 ,  张同 ,  马志鑫 ,  沈剑

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种工程改造枯草芽孢杆菌发酵生产胞磷胆碱的方法。本发明以枯草芽孢杆菌为底盘，首先在枯草芽孢杆菌基因组上共表达酿酒酵母的胆碱激酶基因CKI和磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT，向发酵培养基中添加前体物氯化胆碱和5'‑胞苷单磷酸，然后整合表达内源的甘氨酸甜菜碱和砷酸甜菜碱转运蛋白基因opuD，最后缺陷5′‑核苷酸酶YfkN，以期减少CMP到胞苷的合成。结果表明：经本发明工程改造之后获得的枯草芽孢杆菌能够发酵合成胞磷胆碱，具有精确修饰目标基因、次级突变概率低、遗传育种周期短的优势，本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建高效合成胞磷胆碱的枯细胞工厂提供了基础研究和理论依据。

公开(公告)号：CN116790466A

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202310882430.X

申请日：2023-07-19

Applicant: 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

Inventor： 杨绍梅 ,  马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  崔希礼 ,  张同 ,  马志鑫 ,  沈剑

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种工程改造枯草芽孢杆菌发酵生产胞磷胆碱的方法。本发明以枯草芽孢杆菌为底盘，首先在枯草芽孢杆菌基因组上共表达酿酒酵母的胆碱激酶基因CKI和磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT，向发酵培养基中添加前体物氯化胆碱和5'‑胞苷单磷酸，然后整合表达内源的甘氨酸甜菜碱和砷酸甜菜碱转运蛋白基因opuD，最后缺陷5′‑核苷酸酶YfkN，以期减少CMP到胞苷的合成。结果表明：经本发明工程改造之后获得的枯草芽孢杆菌能够发酵合成胞磷胆碱，具有精确修饰目标基因、次级突变概率低、遗传育种周期短的优势，本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建高效合成胞磷胆碱的枯细胞工厂提供了基础研究和理论依据。