公开(公告)号：CN116555170A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202211100109.3

申请日：2022-09-09

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 朱桂玉 ,  孟璐 ,  马玉晓 ,  张允 ,  王续钊 ,  姜运良 ,  李显耀 ,  王恒

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种成年鸡卵原干细胞的体外分离培养方法及其应用，属于干细胞培养技术领域。本发明的鸡卵原干细胞的体外分离培养方法包括以下步骤：将成年鸡卵巢的皮质部分破碎成组织团块，用包含双抗的PBS缓冲液漂洗，静置后得到下层的组织团；用胰酶消化处理组织团，用磁珠活化细胞分选缓冲液进行重悬，加入一抗，孵育10‑20min；然后再加入二抗磁珠，共孵育20‑30min；用磁珠活化细胞分选缓冲液进行洗脱，收集包含目的细胞的洗脱液；将包含目的细胞的洗脱液依次进行原代培养、传代培养。本发明开创性的从成年鸡卵巢中体外分离培养得到鸡卵原干细胞，能够为延长鸡的产蛋周期、提高鸡的繁殖性能提供新的思路的途径。

公开(公告)号：CN116121174A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202211207499.4

申请日：2022-09-30

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 王恒 ,  马彤彤 ,  郑馨仪 ,  朱桂玉 ,  任瑞敏 ,  华耀 ,  叶婷婷 ,  杨刘斌

IPC: C12N5/073 ,  C12N13/00

Abstract: 本发明公开了一种鸡胚胎成纤维细胞体外三维培养和分离的方法，属于细胞培养技术领域。本发明的培养方法包括以下步骤：(1)将鸡胚胎成纤维细胞复苏后至少传代培养一代，获得细胞悬液，离心，丢弃上清液，加入GelMA水凝胶溶液，重悬细胞，得到混合液；(2)将混合液用紫外光源照射，获得鸡胚胎成纤维细胞‑GelMA水凝胶复合物；(3)将鸡胚胎成纤维细胞‑GelMA水凝胶复合物转移至培养皿中，加入培养液，细胞培养7‑9d；(4)细胞培养结束后，弃去培养液，加入胶原蛋白II酶消化处理5‑10min，离心，收集细胞沉淀。本发明建立的鸡胚胎成纤维细胞三维培养体系更好的模拟了细胞体内生存环境，可以实现鸡胚胎成纤维细胞在体外立体培养介质中的快速增殖，更具有研究价值。

公开(公告)号：CN118389512A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410626901.5

申请日：2024-05-21

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 朱桂玉 ,  薛曼 ,  王恒 ,  马玉晓 ,  魏佳慧 ,  郭晓彤 ,  孙晴 ,  孙洪财 ,  张树芹 ,  潘凯鑫

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种特异性靶向鸡GSDME基因的双sgRNA系统及应用，属于动物基因组编辑技术领域。本发明的特异性靶向鸡GSDME基因的双sgRNA组合，包括GSDME‑sgRNA1和GSDME‑sgRNA2；所述GSDME‑sgRNA1的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述GSDME‑sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。通过将所述的两条sgRNA构建至构建的双sgRNA表达载体上，只需通过脂质体转染的方式，就能够在鸡成纤维细胞中实现高效率的GSDME基因敲除。与单个sgRNA靶向敲除相比，从不足15％的基因编辑效率显著提高到90％以上。本发明通过构建GSDME双sgRNA表达载体，使两条有效的sgRNA同时表达，提高基因编辑效率，为之后研究GSDME基因抗细胞焦亡的作用机制及制备抗病转基因鸡提供一个高效可行的方法。

公开(公告)号：CN117007813A

公开(公告)日：2023-11-07

申请号：CN202310817425.0

申请日：2023-07-05

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 朱桂玉 ,  马玉晓 ,  王恒 ,  王续钊 ,  薛曼 ,  魏佳慧 ,  郭晓彤 ,  孟璐

IPC: G01N33/68 ,  G01N21/64 ,  C12Q1/6888 ,  C12N5/0735 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了FOXO3基因及其靶向抑制剂在鸡原始生殖细胞增殖及迁移定植中的应用，属于生物技术领域。本发明深入研究了靶向下调FOXO3基因表达对鸡原始生殖细胞增殖和体内迁移效率的影响。结果表明，在现有的培养鸡原始生殖细胞培养液基础上添加1μM的FOXO3的抑制剂Carbenoxolone(CBX)可显著促进鸡原始生殖细胞的体外增殖。经验证，干扰FOXO3基因表达也会显著促进鸡原始生殖细胞增殖。另外，经1μM抑制剂CBX处理后的原始生殖细胞，注射入鸡胚体内，迁移定植性腺能力出现了显著升高。本发明能有效地促进体外鸡原始生殖细胞的增殖能力,基础培养液中添加适宜浓度CBX对鸡原始生殖细胞可显著提高迁移定植到性腺的能力，且能很好的维持其生物学特性。

公开(公告)号：CN116334087A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310520669.2

申请日：2023-05-10

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 王恒 ,  陈君怡 ,  朱桂玉 ,  王昌英 ,  王梦雨 ,  马玉晓

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N15/85 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了特异性靶向猪Pax3基因的sgRNA序列及其应用，属于动物基因工程技术领域。本发明的特异性靶向猪Pax3基因的sgRNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。将其与Crispr‑Cas9系统相结合，使其在目的基因位点处产生双链断裂，从而能够通过非同源末端修复机制造成Pax3基因起始密码子ATG附近的碱基随机缺失或插入，进而导致猪Pax3基因表达被沉默，以研究Pax3基因缺失对猪自身生长发育的影响；还可以通过同源重组，将外源基因插入基因组目标位点，从而在Pax3基因目标位点处实现精准高效的基因编辑。本发明为深入研究Pax3基因在猪生长发育过程中的具体作用机制及制备Pax3转基因猪提供一个简单可行的方法。

公开(公告)号：CN218125427U

公开(公告)日：2022-12-27

申请号：CN202222223700.X

申请日：2022-08-24

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 刘双喜 ,  王恒 ,  康广皓 ,  李军贤 ,  田鑫钰 ,  冯尚宗 ,  马盼 ,  黄信诚

IPC: A01C7/20

Abstract: 本实用新型涉及一种用于水稻籽粒的外槽滚轴式匀量排种机构，包括种箱、与种箱下端的出料口适配的外槽滚轴，以及位于外槽滚轴下方的支架，外槽滚轴的一端连接有驱动电机，外槽滚轴的外弧面设有外槽穴，外槽滚轴的出料侧下方设有安装在支架上的倾斜缓冲板，倾斜缓冲板的下端下方设有传送带。本实用新型在使用时，水稻种子从外槽倾落后，由倾斜缓冲板承接并依靠倾斜角度下落，在水稻种子排出过程中，通过外槽滚轴的匀量排种和倾斜缓冲板倾斜落种设计，使种子群呈均匀面状下落，排种机构排种后，水稻种子最终落至传送带，传送带匀速运动带来的摩擦力，使传送带上的布种状态平铺且更加均匀化，解决了水稻种子堆积过密的问题。

公开(公告)号：CN217726301U

公开(公告)日：2022-11-04

申请号：CN202220902801.7

申请日：2022-04-19

Applicant: 山东农业大学

Inventor： 刘双喜 ,  王恒 ,  康广皓 ,  李军贤 ,  田鑫钰

IPC: B07C5/34 ,  B07C5/36

Abstract: 本实用新型涉及一种基于电磁式负压原理的杂草稻种子吸取装置，包括吸种管，以及通过吸管与吸种管的出种端连通的存储室，所述存储室连通负压发生室；所述吸种管的吸种端设有吸头阀门，吸种管上设有向上拉动吸头阀门打开的复位弹簧，复位弹簧的上端连接有动铁芯，动铁芯的上方设有电磁发生器，电磁发生器未通电时，复位弹簧在动铁芯的重力作用下处于压缩状态。本实用新型依靠微型控制器传输命令从而控制电磁阀和电机转速，通过电磁作用实现对吸种管末端阀门的打开与关闭，通过控制电机电机转速达到了对负压环境的控制，能够保证优质种子，以及传送带表面和空气中的其他颗粒不会误入吸种管，有利于精确收集杂草稻种子，从而提高水稻种子的合格率。