公开(公告)号：CN109943521A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910307643.3

申请日：2019-04-17

Applicant: 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所

Inventor： 沈学怀 ,  潘孝成 ,  赵瑞宏 ,  张丹俊 ,  戴银 ,  胡晓苗 ,  候宏艳 ,  周学利 ,  朱林

IPC: C12N5/071 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种适用于猪流行性腹泻病毒培养的仔猪肠道上皮细胞快速制备方法。包括以下步骤：取新生仔猪小肠肠道，剪成肠断，纵向剖开，用磷酸盐缓冲液反复清洗；刮取肠腔面的肠上皮组织用DMEM/F12不完全培养基分散细胞团，离心清洗细胞；用DMEM/F12完全培养基悬浮细胞，调整细胞团密度，在37℃浓度5%二氧化碳气体条件下培养，得到生长成片细胞团；加入胰酶消化液，进行细胞纯化，纯化过程可反复进行，直至得到生长状态良好的仔猪肠道上皮细胞。本发明通过肠腔面的机械分离和纯化得到生长状态良好的仔猪肠道上皮细胞，所获得的肠道上皮细胞适用于猪流行性腹泻病毒培养，为研究猪流行性腹泻病毒感染对仔猪肠道上皮细胞的细胞和分子机制提供快速的技术方案。

公开(公告)号：CN109943537A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910293949.8

申请日：2019-04-12

Applicant: 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所

Inventor： 沈学怀 ,  潘孝成 ,  赵瑞宏 ,  张丹俊 ,  戴银 ,  胡晓苗 ,  候宏艳 ,  周学利 ,  朱林

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开一种用于公鸡精液中白血病病毒分离的处理液及制备方法。所述的处理液主要成分为：8g/L氯化钠、0.2g/L氯化钾、1.44g/L磷酸氢二钠、0.24g/L磷酸二氢钾、500～1000kU/L青霉素、0.5～1g/L链霉素、1～2mg/L两性霉素B、10～15mg/L恩诺沙星。所述上述试剂依次加入溶剂瓶，加入蒸馏水溶解、混匀、定容，将溶液用0.22um滤膜过滤除菌后低温保存。使用时将公鸡精液和处理液按1:4的比例混匀后4℃环境下孵育30min，8000r/min离心5分钟取上清接种细胞，用于禽白血病病毒分离。使用本处理液可有效减少公鸡精液接种细胞造成的污染，增加病毒分离的成功率，有利于禽白血病病毒的检测。