公开(公告)号：CN118165909A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410284071.2

申请日：2024-03-13

Applicant: 宁夏农林科学院枸杞科学研究所

Inventor： 樊云芳 ,  陈晓军 ,  李姝瑶 ,  戴国礼 ,  秦小雅 ,  尹跃 ,  梁晓婕

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种基于枸杞原生质体的瞬时转化的方法。属于生物技术领域。本发明采用了枸杞的“胶带三明治法”在无菌叶片上去除下表皮，并在酶解前使用甘露醇预处理。只需4小时即可获得2.34×106g‑1·FW的原生质体，活力比率达91.26％。通过将原生质体与含有质粒DNA的溶液在40％PEG4000和0.2M甘露醇的条件下孵育20分钟，实现了约40％的转染效率。此外，采用亚细胞定位研究验证了转化系统的可靠性和有效性。本发明建立了一种高效的枸杞原生质体分离和PEG介导转化系统，为分子研究奠定了基础，并提供了一种新的转化途径，可用于后续的生物育种工作。