公开(公告)号：CN118931896A

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN202410421468.1

申请日：2024-04-09

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  崔冲 ,  汪胜义 ,  王大奇

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N9/78 ,  C12N15/864 ,  A61K48/00 ,  A61K38/17 ,  A61P27/16 ,  A61P25/00

Abstract: 本发明公开了一种用于修复OTOF基因p.Q829X突变的单碱基编辑系统及其应用。所述单碱基编辑系统包括：腺嘌呤碱基编辑器和sgRNA，所述sgRNA的靶向序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过纯合OtofQ828X/Q828X小鼠模型实验评价了该系统对小鼠听力损失的影响。结果发现，该系统能特异靶向OtofQ828X/Q828X小鼠内毛细胞对点突变进行有效修复，成功地纠正了C>T的突变，且在长达一年的观察期内，持续检测到听力恢复至野生型水平，同时观察到otoferlin蛋白表达和内毛细胞持续囊泡释放功能的恢复，直观地验证了该系统对OTOF(c.2482C>T，p.Q828X)突变基因导致的听神经病的治疗和/或预防作用，能够用于制备治疗和/或预防听神经病的药物。

公开(公告)号：CN119220539A

公开(公告)日：2024-12-31

申请号：CN202410898477.X

申请日：2024-07-05

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  胡少伟 ,  崔冲 ,  王大奇

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/02 ,  C12N5/10 ,  A61K48/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公布一种GJB2启动子序列及其载体和应用，其中所述启动子序列是下列任一核苷酸序列之一：1)序列表中SEQ ID NO.1序列；2)与序列表中SEQ ID NO.1序列具有85％以上同源性且具有相同功能的DNA序列。本发明序列可操作地连接至目的基因，以驱动目的基因在内耳支持细胞中的特异性表达，实现在耳科研究中，特别是内耳基因治疗中发挥重要作用，可用于治疗患有听力损失或前庭功能障碍或有此风险的受试者，具有广泛的应用前景与临床价值。

公开(公告)号：CN113584082B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202110691504.2

申请日：2021-06-22

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  薛媛媛 ,  王大奇

IPC: C12N15/864 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开了一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其在制备治疗遗传性感音神经性聋的药物中的应用，所述的基因编辑系统包括特异性靶向Myo6C442Y突变基因的gRNA以及SaCas9‑KKH，并通过AAV‑PHP.eB病毒载体递送，形成了有效的针对Myo6C442Y的敲除系统。本发明通过Myo6WT/C442Y小鼠模型实验，评价其对小鼠听力损失的影响，结果发现AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2系统能特异性地敲除Myo6WT/C442Y小鼠中的Myo6C442Y突变等位基因，且Myo6WT/C442Y小鼠中注射AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2后可在长达5个月的时间内，观察到听觉功能的恢复，同时，还观察到ABR I波潜伏期变短、细胞存活率提高、纤毛形态变规则，直观地验证了AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2系统对Myo6C442Y突变基因导致的半显性遗传感音神经性聋的治疗作用，可用于制备治疗半显性遗传感音神经性聋的药物。

公开(公告)号：CN113181376B

公开(公告)日：2022-11-29

申请号：CN202110288529.8

申请日：2021-03-17

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  徐值娇

IPC: A61K48/00 ,  A61K31/7088 ,  A61K9/00 ,  A61P27/16 ,  C12N15/864 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了Htra2基因表达抑制剂在预防获得性感音神经性聋中的应用。Htra2基因表达抑制剂用于预防氨基糖甙类抗生素所致耳毒性聋。本发明还提供了一种用于预防获得性感音神经性聋的CRISPR/Cas9基因编辑系统，所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统靶向并敲除Htra2基因。本发明证实AAV‑CRISPR/Cas9‑Htra2基因编辑体系内耳显微注射可安全、有效预防氨基糖甙类抗生素所致耳毒性聋。

公开(公告)号：CN113584082A

公开(公告)日：2021-11-02

申请号：CN202110691504.2

申请日：2021-06-22

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  薛媛媛 ,  王大奇

IPC: C12N15/864 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开了一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其在制备治疗遗传性感音神经性聋的药物中的应用，所述的基因编辑系统包括特异性靶向Myo6C442Y突变基因的gRNA以及SaCas9‑KKH，并通过AAV‑PHP.eB病毒载体递送，形成了有效的针对Myo6C442Y的敲除系统。本发明通过Myo6WT/C442Y小鼠模型实验，评价其对小鼠听力损失的影响，结果发现AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2系统能特异性地敲除Myo6WT/C442Y小鼠中的Myo6C442Y突变等位基因，且Myo6WT/C442Y小鼠中注射AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2后可在长达5个月的时间内，观察到听觉功能的恢复，同时，还观察到ABR I波潜伏期变短、细胞存活率提高、纤毛形态变规则，直观地验证了AAV‑SaCas9‑KKH‑Myo6‑g2系统对Myo6C442Y突变基因导致的半显性遗传感音神经性聋的治疗作用，可用于制备治疗半显性遗传感音神经性聋的药物。

公开(公告)号：CN113181376A

公开(公告)日：2021-07-30

申请号：CN202110288529.8

申请日：2021-03-17

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  徐值娇

IPC: A61K48/00 ,  A61K31/7088 ,  A61K9/00 ,  A61P27/16 ,  C12N15/864 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了Htra2基因表达抑制剂在预防获得性感音神经性聋中的应用。Htra2基因表达抑制剂用于预防氨基糖甙类抗生素所致耳毒性聋。本发明还提供了一种用于预防获得性感音神经性聋的CRISPR/Cas9基因编辑系统，所述的CRISPR/Cas9基因编辑系统靶向并敲除Htra2基因。本发明证实AAV‑CRISPR/Cas9‑Htra2基因编辑体系内耳显微注射可安全、有效预防氨基糖甙类抗生素所致耳毒性聋。

公开(公告)号：CN117305367A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311051611.4

申请日：2023-08-21

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  王武庆 ,  陈兵 ,  刘建平 ,  王大奇 ,  汤洪海 ,  张龙龙 ,  王会 ,  吕俊 ,  寻梦钊

IPC: C12N15/864 ,  C12N15/12 ,  C12N15/55 ,  A61K48/00 ,  A61K38/17 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开了一种表达全长耳畸蛋白的双AAV载体系统及其应用。所述双AAV载体系统包括：第一AAV载体，其包含在5’和3’ITR之间的第一核酸序列，所述第一核酸序列包含：依次连接的启动子、耳畸蛋白N端编码序列、剪接供体信号序列、重组序列；第二AAV载体，其包含在5’和3’ITR之间的第二核酸序列，所述第二核酸序列包含：依次连接的重组序列、剪接受体信号序列、耳畸蛋白C端编码序列。所述第一AAV载体和第二AAV载体能够在内毛细胞中发生高效的同源重组或AAV交联，继而高效的表达全长耳畸蛋白，最终恢复或改善OTOF基因缺失或突变患者的听力。

公开(公告)号：CN114369600A

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN202210107537.2

申请日：2022-01-28

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  左二伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  胡新德

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开了一种用于修复Klhl18lowf突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用，该系统包括特异性靶向Klhl18lowf的sgRNA、同源修复供体模板以及Cas9，并通过腺相关病毒载体递送，形成有效修复突变基因的编辑系统。本发明通过纯合Klhl18lowf小鼠模型实验，评价其对听力功能的影响，结果发现该系统能对患病小鼠进行精准的体内同源介导修复，成功纠正点突变，且小鼠注射该系统后长达24周内，可观察到听觉功能恢复、纤毛形态变规则、IHC持续囊泡释放功能恢复等，直观地验证了本发明系统对Klhl18lowf导致的感音神经性聋的治疗作用，能够用于制备治疗感音神经性聋的药物。

公开(公告)号：CN118079136A

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202410196093.3

申请日：2024-02-22

Applicant: 河南嘉宇智创科技有限公司 ,  复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  王小虎 ,  范新泰 ,  王豹玺 ,  吕俊 ,  姬兴楠 ,  张龙龙 ,  刘书博 ,  王大奇 ,  程勇

IPC: A61M5/162 ,  A61M5/31 ,  A61M5/178 ,  A61F9/00 ,  A61F11/00 ,  A61M5/145 ,  A61M5/158 ,  A61M5/32

Abstract: 本发明涉及一种低残留微量泵液注射装置，包括微量泵、注射筒、钢针式药液转移器及输液管路，注射筒安装在微量泵的注射卡筒内，注射筒的针筒的前端设置有注射密封塞，输液管路的一端设置后连接针管，输液管路的另一端设置穿刺针管，后连接针管与穿刺针管通过输液管路的内腔连通，后连接针管穿刺注射密封塞插入注射筒内，后连接针管的内腔连通注射筒内腔与输液管路内腔，穿刺针管用于穿刺进入患者注射部位，注射筒用于盛装药液，微量泵推动推杆移动将注射筒内的药液经输液管路注射到患者注射部位，注射筒的容积为0.2~0.5ml，输液管路的管路内径为0.2~0.3mm，本发明能够有效的减少药液残留，减少药液浪费，降低医疗成本，减少患者经济负担。

公开(公告)号：CN114369600B

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202210107537.2

申请日：2022-01-28

Applicant: 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院

Inventor： 舒易来 ,  李华伟 ,  左二伟 ,  顾晰 ,  王大奇 ,  胡新德

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P27/16

Abstract: lowf本发明公开了一种用于修复Klhl18 突变基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用，该系统包括特异性靶向Klhl18lowf的sgRNA、同源修复供体模板以及Cas9，并通过腺相关病毒载体递送，形成有效修复突变基因的编辑系统。本发明通过纯合Klhl18lowf小鼠模型实验，评价其对听力功能的影响，结果发现该系统能对患病小鼠进行精准的体内同源介导修复，成功纠正点突变，且小鼠注射该系统后长达24周内，可观察到听觉功能恢复、纤毛形态变规则、IHC持续囊泡释放功能恢复等，直观地验证了本发明系统对Klhl18lowf导致的感音神经性聋的治疗作用，能(56)对比文件Neil J Ingham等.Inner hair celldysfunction in Klhl18 mutant mice leadsto low frequency progressive hearingloss.Plos One.2021,第16卷摘要及图1、第2页第4段.李永顺.利用CRISPR/Cas9修复MITF突变导致的猪眼睛发育缺陷.中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）基础科学辑.2018,(第12期),第1-85页.Masafumi Inui等.Rapid generation ofmouse models with defined point mutationsby the CRISPR/Cas9 system.SCIENTIFICREPORTS.2014,第04卷第1-8页.Xi Gu等.Treatment of autosomalrecessive hearing loss via in vivoCRISPR/Cas9-mediated optimized homology-directed repair in mice.CellResearch.2022,第32卷第699-702页.Xuan Yao等.Homology-mediated endjoining-based targeted integration usingCRISPR/Cas9.Cell Research.2017,第27卷第801-814页.Xuan Yao等.CRISPR/Cas9-mediatedtargeted integration in vivo using ahomology-mediated end joining-basedstrategy.Journal of VisualizedExperiments.2018,第133卷第1-7页.Ruigao Song等.A pig model carryingheterozygous point mutaition of NCSTNsimulates familial acne inversa andreveals dysregulated cholesterolbiosynthesis via the Notch-pAMPK-HMGCRpathway.Science Bulletin.2021,第66卷第2343-2346页.Cia-Hin Lau等.CRISPR-based strategiesfor targeted transgene knock-in and genecorrection.Faculty Reviews.2020,第09卷第1-28页.Long Xie等.HMEJ-mediated efficientsite-specific gene integration in chickencells.Journal of BiologicalEngineering.2019,第13卷第1-10页.吴志胜等.精准高效外源DNA整合技术研究进展.生物技术通报.2020,(第03期),第29-37页.