公开(公告)号：CN115125313A

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202210607278.X

申请日：2022-05-31

Applicant: 吉林大学

Inventor： 卢士英 ,  肖毅然 ,  柳溪林 ,  任洪林 ,  胡盼 ,  李岩松 ,  王洋 ,  王菡 ,  王聪 ,  郭禹汐

IPC: C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明涉及一种致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌检测用引物对和基于CRISPR/Cas12a检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的现场可视化试剂盒及应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明提供了一种用于检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的引物对，所述引物对包括ail‑F和ail‑R，所述ail‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述ail‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述引物对能够基于CRISPR/Cas12a实现致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的现场可视化检测，快速且准确，灵敏度高，特异性强。

公开(公告)号：CN116121408A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202211090936.9

申请日：2022-09-07

Applicant: 吉林大学

Inventor： 卢士英 ,  肖毅然 ,  任洪林 ,  李香荷 ,  王菡 ,  胡盼 ,  李岩松 ,  柳增善 ,  王聪 ,  郭禹汐

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用，所述试剂盒包含RPA扩增试剂和CRISPR/Cas12a检测试剂。本发明还公开了一种使用所述的现场可视化试剂盒检测单增李斯特菌的方法，所有试剂放在同一离心管中进行检测，操作简单，避免了样品及环境污染。利用本发明的试剂盒及检测方法进行单增李斯特菌的检测，可以实现37℃条件下恒温检测，大幅降低RPA反应体积，可以实现在25分钟内对4.4CFU/g的细菌检测，结果实现可视化。本发明的方法具有降低RPA体系损耗，扩增体系与检测体系完全分离、避免交叉污染、结果可视化等优点。

公开(公告)号：CN113755612A

公开(公告)日：2021-12-07

申请号：CN202110397506.0

申请日：2021-04-14

Applicant: 吉林大学

Inventor： 卢士英 ,  郑宇 ,  柳溪林 ,  任洪林 ,  胡盼 ,  柳增善 ,  李岩松 ,  王菡 ,  肖毅然 ,  王聪

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用。所述特异性引物对为Fe和Re，Fe的序列如SEQ ID NO.1所示，Re的序列如SEQ ID NO.2所示。所述检测试剂盒包括特异性引物对、RPA核酸扩增试剂、量子点荧光微球与地高辛抗体的偶联物QDNBs‑McAb、核酸检测试纸条、上样缓冲液。特异性引物对的5’端分别修饰有地高辛和生物素，经过RPA核酸扩增后，阳性产物带有地高辛和生物素标记。本发明成功设计筛选了适用于RPA的特异性引物对，建立了能够鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测方法，其最低检测限为9.6×103CFU/mL。所建立的方法无需使用大型仪器，适合于现场检测，并且该方法从基因组提取到肉眼观察结果的过程仅需要10min左右。