公开(公告)号：CN110220994A

公开(公告)日：2019-09-10

申请号：CN201910599052.8

申请日：2019-07-04

Applicant: 南通大学附属医院

Inventor： 王峰 ,  季伙燕 ,  吴安琪 ,  李袆 ,  鞠少卿 ,  王建新 ,  沈蕾

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/08

Abstract: 本发明公开了一种同位素稀释质谱法测定血清miR-224含量的方法，包括如下步骤：(1)合成miR-224核酸单链并配成溶液，建立标准曲线；(2)合成核酸肽探针并配成溶液，用以捕获miR-224；(3)合成同位素标记的多肽并配成溶液作为内标；(4)在血清样本中提取miRNA；(5)将提取出的miRNA生物素化；(6)将上述miRNA与链霉素琼脂糖球反应，形成miRNA-生物素-链霉亲和素琼脂糖球复合物；(7)加入核酸肽探针捕获miR-224-生物素-链霉亲和素琼脂糖球复合物；(8)将上述复合物清洗干净后加入胰蛋白酶酶解，然后将酶解产物固相萃取，将萃取出的多肽吹干并复溶；(9)将复溶后的多肽和同位素标记的多肽样品进行质谱分析；(10)计算血清样本中miR-224含量。本发明准确度高，结果可靠。

公开(公告)号：CN110220994B

公开(公告)日：2022-02-18

申请号：CN201910599052.8

申请日：2019-07-04

Applicant: 南通大学附属医院

Inventor： 王峰 ,  季伙燕 ,  吴安琪 ,  李袆 ,  鞠少卿 ,  王建新 ,  沈蕾

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/08

Abstract: 本发明公开了一种同位素稀释质谱法测定血清miR‑224含量的方法，包括如下步骤：(1)合成miR‑224核酸单链并配成溶液，建立标准曲线；(2)合成核酸肽探针并配成溶液，用以捕获miR‑224；(3)合成同位素标记的多肽并配成溶液作为内标；(4)在血清样本中提取miRNA；(5)将提取出的miRNA生物素化；(6)将上述miRNA与链霉素琼脂糖球反应，形成miRNA‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(7)加入核酸肽探针捕获miR‑224‑生物素‑链霉亲和素琼脂糖球复合物；(8)将上述复合物清洗干净后加入胰蛋白酶酶解，然后将酶解产物固相萃取，将萃取出的多肽吹干并复溶；(9)将复溶后的多肽和同位素标记的多肽样品进行质谱分析；(10)计算血清样本中miR‑224含量。本发明准确度高，结果可靠。