公开(公告)号：CN101581722A

公开(公告)日：2009-11-18

申请号：CN200910040379.8

申请日：2009-06-19

Applicant: 南方医科大学珠江医院

Inventor： 李治国 ,  高毅 ,  汪艳 ,  刘金华 ,  杜江

IPC: G01N33/536 ,  G01N33/534 ,  G01N23/00 ,  G01T1/00

Abstract: 本发明提供一种检测纳克级含量的白蛋白的方法，该方法包括将白蛋白标准品稀释至在纳克级别内适当分布的浓度梯度，加入过量的白蛋白抗体，并进行第一次温育；向温育后的液体中加入相对于剩余白蛋白抗体是过量的放射性同位素标记的白蛋白，并进行第二次温育以使得一部分放射性同位素标记的白蛋白与白蛋白抗体结合为复合物；分离所述复合物并测定复合物的放射性计数；根据放射性计数及相应的标准品中白蛋白的浓度确定两者之间的关系式；以待测样品代替白蛋白标准品重复步骤，根据对待测样品所测得的放射性计数和所述关系式确定待测样品中白蛋白的浓度。该方法能够检测出纳克级含量的白蛋白，且准确率高，稳定性好。

公开(公告)号：CN102061284A

公开(公告)日：2011-05-18

申请号：CN201010205227.1

申请日：2010-06-13

Applicant: 南方医科大学珠江医院

Inventor： 李治国 ,  高毅 ,  刘广波 ,  汪艳 ,  杜江 ,  赵欣 ,  张志

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明提供了一种人原代肝细胞分离培养方法，包括以下步骤：用D-Hank’s液清洗肝组织表面血块，并将结缔组织剪除；用针头注射器多点穿刺灌注预温38℃的前灌流液，使肝组织块由暗红色变为灰白色且流出的前灌流液变清亮；继以预温的II型胶原酶溶液针头多点穿刺灌注，直至组织块变疏松、失去弹性，表面呈龟背状裂隙，II型胶原酶溶液可循环使用；剪开组织块，钝性分离肝组织，并去除残存的包膜和纤维结缔组织，然后继续在II型胶原酶溶液中37℃震荡消化；将消化物吹打为细胞悬液，在冰浴条件下，过滤，收集过滤后的肝细胞悬液，移至离心管中，低速离心；第一次低速离心所得底层沉淀加入红细胞裂解液，吹打，室温静置后加入DMEM混匀清洗、低速离心，再加入DMEM混匀、低速离心重复2-4次，最后一次低速离心所得沉淀加入Williams’Medium E完全培养基悬浮；调整肝细胞密度为1×105/ml，接种于铺有鼠原胶原的培养瓶中，于CO2培养箱中37℃恒温培养，贴壁后，换液除去死亡及未贴壁细胞，继续培养。本发明建立的人原代肝细胞培养模型简便易行，成本低。