公开(公告)号：CN102061284A

公开(公告)日：2011-05-18

申请号：CN201010205227.1

申请日：2010-06-13

Applicant: 南方医科大学珠江医院

Inventor： 李治国 ,  高毅 ,  刘广波 ,  汪艳 ,  杜江 ,  赵欣 ,  张志

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明提供了一种人原代肝细胞分离培养方法，包括以下步骤：用D-Hank’s液清洗肝组织表面血块，并将结缔组织剪除；用针头注射器多点穿刺灌注预温38℃的前灌流液，使肝组织块由暗红色变为灰白色且流出的前灌流液变清亮；继以预温的II型胶原酶溶液针头多点穿刺灌注，直至组织块变疏松、失去弹性，表面呈龟背状裂隙，II型胶原酶溶液可循环使用；剪开组织块，钝性分离肝组织，并去除残存的包膜和纤维结缔组织，然后继续在II型胶原酶溶液中37℃震荡消化；将消化物吹打为细胞悬液，在冰浴条件下，过滤，收集过滤后的肝细胞悬液，移至离心管中，低速离心；第一次低速离心所得底层沉淀加入红细胞裂解液，吹打，室温静置后加入DMEM混匀清洗、低速离心，再加入DMEM混匀、低速离心重复2-4次，最后一次低速离心所得沉淀加入Williams’Medium E完全培养基悬浮；调整肝细胞密度为1×105/ml，接种于铺有鼠原胶原的培养瓶中，于CO2培养箱中37℃恒温培养，贴壁后，换液除去死亡及未贴壁细胞，继续培养。本发明建立的人原代肝细胞培养模型简便易行，成本低。

公开(公告)号：CN101581722A

公开(公告)日：2009-11-18

申请号：CN200910040379.8

申请日：2009-06-19

Applicant: 南方医科大学珠江医院

Inventor： 李治国 ,  高毅 ,  汪艳 ,  刘金华 ,  杜江

IPC: G01N33/536 ,  G01N33/534 ,  G01N23/00 ,  G01T1/00

Abstract: 本发明提供一种检测纳克级含量的白蛋白的方法，该方法包括将白蛋白标准品稀释至在纳克级别内适当分布的浓度梯度，加入过量的白蛋白抗体，并进行第一次温育；向温育后的液体中加入相对于剩余白蛋白抗体是过量的放射性同位素标记的白蛋白，并进行第二次温育以使得一部分放射性同位素标记的白蛋白与白蛋白抗体结合为复合物；分离所述复合物并测定复合物的放射性计数；根据放射性计数及相应的标准品中白蛋白的浓度确定两者之间的关系式；以待测样品代替白蛋白标准品重复步骤，根据对待测样品所测得的放射性计数和所述关系式确定待测样品中白蛋白的浓度。该方法能够检测出纳克级含量的白蛋白，且准确率高，稳定性好。

公开(公告)号：CN201665680U

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN201020148518.7

申请日：2010-03-19

Applicant: 南方医科大学珠江医院

Inventor： 高毅 ,  周焕城 ,  葛梅 ,  李治国 ,  赵逸超

IPC: C12M3/00

Abstract: 本实用新型公开一种流向控制器，用于任意切换进入其中的流体的流向后回流，其包括：四个电控三通阀，每个电控三通阀均具有一垂直口、第一顺水口、第二顺水口、以及电子阀门，该电子阀门受控切换至垂直口与第一顺水口相连通，或切换至垂直口和第二顺水口相连通；第一电控三通阀的两个顺水口分别与第三、第四电控三通阀的各第一顺水口相连通，第二电控三通阀的两个顺水口分别与第三、第四电控三通阀的各第二顺水口相连通；控制单元，分别与所述四个电控三通阀电性连接以控制各电子阀门。本实用新型通过采用电控三通阀实现了流向控制的功能，结构简单，成本低廉，操作简便，为生物人工肝领域双向循环灌注技术提供可靠的辅助技术手段。