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公开(公告)号：CN117625700A
公开(公告)日：2024-03-01
申请号：CN202311636775.3
申请日：2023-12-01
申请人： 南京高新工大生物技术研究院有限公司 , 南京工业大学
摘要： 本发明涉及一种固定化大肠杆菌发酵产有机酸的方法及其应用。将大肠杆菌的种子液接种于含有固定化载体和种子培养基的固定化反应器中进行种子固定化培养使得大肠杆菌菌种固定于固定化载体上，再进行单批次固定化补料发酵，最后进行间歇式固定化补料发酵生产有机酸。本发明基于流体力学模拟分析对固定化反应器的设计进行优化，获得了传质、传氧效果较佳的固定化反应器，并通过对发酵过程中的发酵参数进行调控，获得了最佳的产有机酸浓度和高转化率，相对于游离发酵转化率提高大于3个百分点。本发明显著促进了基于固定化的间歇式补料发酵的稳定性，与固定化发酵工艺适配性高，同时节约了葡萄糖用量，经济效益显著，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN113817616B
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202111106831.3
申请日：2021-09-22
申请人： 南京工业大学 , 南京高新工大生物技术研究院有限公司 , 中粮生物科技股份有限公司
摘要： 本发明公开了一株几丁质合酶转录调控基因MedA失活的黑曲霉基因工程菌及其应用。本发明通过基因敲除手段构建了一株几丁质合酶转录调控基因MedA缺失的黑曲霉基因工程菌。该基因工程菌使黑曲霉在固定化发酵产柠檬酸过程中生物膜量减少，使载体孔径被堵死的现象得到有效缓解，增加了载体与外界的传氧传质效果，从而发挥出固定化发酵的优势，提高了柠檬酸的产量，缩短了发酵周期，有效解决了现有工业上黑曲霉发酵生产柠檬酸时产量低、发酵周期长的问题。
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公开(公告)号：CN118581170A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410845171.8
申请日：2024-06-27
申请人： 南京高新工大生物技术研究院有限公司 , 南京工业大学
摘要： 本发明属于工业生物技术领域，具体涉及一种固定化大肠杆菌发酵生产缬氨酸的方法。将大肠杆菌的种子液接种至装有改性载体和种子培养基的固定化反应器中进行固定化培养使得大肠杆菌菌种固定在改性载体上，然后再进行连续发酵生产获得缬氨酸。本发明基于大肠杆菌细胞表面疏水性特性，利用烷基化合物改性固定化载体，显著提高了载体对细胞的吸附能力。同时基于流体力学模拟分析对固定化反应器中的载体形式进行优化，采用单元化载体填充，显著改善了固定化反应器内部流场的分布。最后采用连续发酵的方式，进一步调控补料浓度，使得产酸率可以达到2.8～3.0g/L/h，转化率达到52％以上，大幅提高了发酵强度，因而在实际的工业化发酵生产缬氨酸中具有实际的应用前景。
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公开(公告)号：CN113817616A
公开(公告)日：2021-12-21
申请号：CN202111106831.3
申请日：2021-09-22
申请人： 南京工业大学 , 南京高新工大生物技术研究院有限公司 , 中粮生物科技股份有限公司
摘要： 本发明公开了一株几丁质合酶转录调控基因MedA失活的黑曲霉基因工程菌及其应用。本发明通过基因敲除手段构建了一株几丁质合酶转录调控基因MedA缺失的黑曲霉基因工程菌。该基因工程菌使黑曲霉在固定化发酵产柠檬酸过程中生物膜量减少，使载体孔径被堵死的现象得到有效缓解，增加了载体与外界的传氧传质效果，从而发挥出固定化发酵的优势，提高了柠檬酸的产量，缩短了发酵周期，有效解决了现有工业上黑曲霉发酵生产柠檬酸时产量低、发酵周期长的问题。
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公开(公告)号：CN116622605A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310468440.9
申请日：2023-04-27
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一种重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用。本发明利用CRISPR/cas9技术，先构建出了敲除产孢膜丝氨酸蛋白酶htrC和碱性丝氨酸蛋白酶aprX的出发菌株B.S168△2，再以出发菌株B.S168△2为基础，构建出了八种敲除胞外蛋白酶基因的底盘细胞B.S168△3、B.S168△4、B.S168△5、B.S168△6、B.S168△7、B.S168△8、B.S168△9和B.S168△10，并进一步筛选出了无抗性残留，转化效率高、几乎无胞外蛋白酶且不会影响胞外目的蛋白积累的底盘细胞B.S168△8、B.S168△9和B.S168△10，随后在此基础上又筛选出了最适合分泌表达普鲁兰酶的底盘菌株B.S168△9，构建出的重组菌株B.S168△9amyX相比于原始菌株B.S168的酶活有显著提升。
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公开(公告)号：CN116286583A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310523928.7
申请日：2023-05-10
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一种能高效分解单氰胺和氧化亚磷酸盐的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，所述重组枯草芽孢杆菌在枯草芽孢杆菌中表达氰胺水合酶和亚磷酸盐脱氢酶。本发明所提供的重组枯草芽孢杆菌能分解单氰胺产生尿素作为氮源，分解氧化亚磷酸盐成为磷酸盐作为磷源，改变氮源和磷源的来源途径，使其在特定的MOPS培养基中能正常生长，而不同时具有这两条代谢途径的杂菌微生物就会由于缺乏氮源或磷源营养物质的来源而被“饿死”，从而使重组枯草芽孢杆菌成为特定培养基的优势菌，杂菌就不能生长繁殖。
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公开(公告)号：CN114908030A
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202210511506.3
申请日：2022-05-11
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌表面展示β‑环糊精葡萄糖基转移酶的重组菌及其应用。本发明首次以枯草芽孢杆菌的表面疏水蛋白bslA为锚定蛋白，将环糊精葡萄糖基转移酶展示到枯草芽孢杆菌细胞表面，通过基因工程手段将环糊精葡萄糖基转移酶基因片段与表面疏水蛋白bslA编码基因融合，利用枯草芽孢杆菌整合型质粒pBE2R作为载体，转化到枯草芽孢杆菌中，从而得到一种可以在细胞表面展示环糊精葡萄糖基转移酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌。本发明所涉及的枯草芽孢杆菌工程菌表达体系具有表达稳定、产酶量高的特点，并且作为生物安全菌株，在食品和医药领域具有优势。
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公开(公告)号：CN114606171A
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202210300902.1
申请日：2022-03-24
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一株敲除bluR基因的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，本发明通过敲除bluR基因，解除了蓝光对大肠杆菌生物膜形成的抑制，同时对菌株的生长能力、发酵能力没有产生影响，并将蓝光影响生物膜形成相关基因进行验证。探究其在生物膜形成中的应用，为后续光遗传学工具的利用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112592877B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN202011519849.1
申请日：2020-12-21
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一株过表达lsrC基因的重组大肠杆菌及其构建方法与应用；所述的重组大肠杆菌过表达lsrC基因。本发明通过过表达lsrC基因增加了大肠杆菌菌群的聚集效果，加强了生物膜的形成，通过生物膜的表征实验以及固定化发酵实验证实了lsrC基因的过表达促进了菌群之间的相互作用，加强了生物膜的形成，缩短了发酵周期，提高了L‑苏氨酸的产量和合成效率。
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公开(公告)号：CN110106095B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201910271574.5
申请日：2019-04-04
申请人： 南京工业大学
摘要： 本发明公开了一株钙离子通道CchA基因失活的黑曲霉基因工程菌及其构建方法与应用，它是敲除钙离子通道CchA基因的黑曲霉菌。本发明还公开了上述基因工程菌的构建方法。进一步公开了基因工程菌在生产柠檬酸中的应用。本发明通过构建基因敲除钙离子通道CchA基因的黑曲霉基因工程菌，使黑曲霉在固定化发酵生产柠檬酸过程中生物膜产量降低并且疏水性降低，减轻了载体的抱团现象，提高了柠檬酸产量和糖转化效率，适宜于工业生产。
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