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公开(公告)号：CN118185981A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202211595132.4
申请日：2022-12-13
Applicant: 南京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种基于不同光照下莱茵衣藻的蛋白相互作用分析方法。所述方法将含有向光性目标蛋白和抗性基因Sh Ble的质粒在莱茵衣藻中融合表达，利用博来霉素筛选出阳性克隆株，然后将阳性克隆株在不同光照下大规模培养，最后利用StrepⅡTag亲和柱同时纯化向光性目标蛋白以及与向光性目标蛋白发生相互作用的相关蛋白。本发明方法不需要额外的筛选标记，大大降低了转化株筛选工作量。本发明方法可以扩展到几乎所有莱茵衣藻光致蛋白信号传递通路的分析检测。
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公开(公告)号：CN113122558B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202010048405.8
申请日：2020-01-16
Applicant: 南京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种膜蛋白AmpG的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白AmpG序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白AmpG稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白AmpG的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。
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公开(公告)号：CN113433199A
公开(公告)日：2021-09-24
申请号：CN202010202071.5
申请日：2020-03-20
Applicant: 南京理工大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种使用八甘醇单十二烷基醚进行膜蛋白复合物的非变性质谱分析方法。所述方法先将纯化的膜蛋白复合物在C12E8存在下超滤脱盐，然后置换到含有C12E8的醋酸铵缓冲液中，并用含有C12E8的醋酸铵缓冲液透析进一步去除原始溶液中的表面活性剂，最后在相同的质谱条件下，分别对溶液中含有C12E8的膜蛋白复合物和蛋白质标准品进行质谱分析。本发明采用C12E8代替传统使用的表面活性剂DDM，大大降低膜蛋白的能态，有效维护膜蛋白的天然构象，从而可以快速而且准确地提供膜蛋白的结构生物学方面的信息，效果明显优于传统使用的表面活性剂DDM。
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公开(公告)号：CN113122562A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202010049426.1
申请日：2020-01-16
Applicant: 南京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种膜蛋白YddG的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白YddG序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白YddG稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白YddG的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。
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公开(公告)号：CN113122561A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202010049420.4
申请日：2020-01-16
Applicant: 南京理工大学
IPC: C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/245 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种膜蛋白SohB的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白SohB序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白SohB稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白SohB的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113122559A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202010048406.2
申请日：2020-01-16
Applicant: 南京理工大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/65 , C12N15/62 , C07K14/245
Abstract: 本发明公开了一种膜蛋白SecF的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含了NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白SecF序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白SecF稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白SecF的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。
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公开(公告)号：CN106770613B
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201611237925.3
申请日：2016-12-28
Applicant: 南京理工大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种维生素B12与BtuF蛋白相互作用的分析方法，所述方法将BtuF蛋白置换到pH8.0的醋酸铵缓冲液中，加入维生素B12制备BtuF‑VB溶液，并对BtuF蛋白、BtuF‑VB蛋白复合物、蛋白质标准品进行质谱分析，采集离子淌度数据，并对离子淌度数据进行处理，得到各自的漂移时间分布，根据蛋白质标准品的漂移时间分布和理论碰撞横截面积，BtuF蛋白、BtuF‑VB的漂移时间分布，得到BtuF、BtuF‑VB的碰撞横截面积，根据漂移时间分布和碰撞横截面积，分析BtuF‑VB的相互作用。本发明离子淌度质谱方法操作简单、所需样品量少、重复性好，能快速准确的提供蛋白质结构信息。
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公开(公告)号：CN108441506A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810206123.9
申请日：2018-03-13
Applicant: 南京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建及表达纯化方法。所述的构建方法利用大肠杆菌质粒给硫化叶菌目标蛋白复合物的亚基基因带上10×His-StrepⅡ标签序列，然后将带标签的目的基因连接到pSeSD中，得到pSeSD表达载体，再将pSeSD表达载体转化到硫化叶菌中，阿拉伯糖诱导目的基因表达，通过该亚基与蛋白复合物其他亚基间的相互作用，利用目的蛋白上的His标签纯化整个蛋白复合物。本发明方法使硫化叶菌复合物的表达纯化更加简单，且易于操作，可以用于硫化叶菌复合物的研究工作。
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公开(公告)号：CN104962530B
公开(公告)日：2017-12-12
申请号：CN201510306986.X
申请日：2015-06-05
Applicant: 南京理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酶融合表达蛋白及其在虾青素生产方面的应用，本发明通过酶融合表达技术将Lycopene lyclase和CrtW融合在一起，让CrtW优先与β‑胡萝卜素反应，减少了其他中间产物的累积，从而提高虾青素产率，具有广泛前景。
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公开(公告)号：CN106979973A
公开(公告)日：2017-07-25
申请号：CN201610035717.9
申请日：2016-01-19
Applicant: 南京理工大学
IPC: G01N27/64
CPC classification number: G01N27/64
Abstract: 本发明公开了一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法，将静电纺丝技术与生物质谱技术相结合，首先利用静电纺丝技术为MALDI质谱分析制备大量所需样品，然后使用蛋白质组学数据库对所得数据进行检索分析，明确各样品颗粒内蛋白质的组成成分，最后利用蛋白质组学数据统计分析软件对各样品颗粒内蛋白质的组成成分进行统计，明确细胞内不同种蛋白质相互作用的几率，最终为构建细胞内各生物分子间的三维相互作用图提供云数据支持。本发明方法操作简便，可实现高通量检测分析，不需要使研究物种被基因修饰，克服了一般质谱方法灵敏度低和需要基质分子促使分析对象发生离子化的缺陷。
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