一种基于RPA-CRISPR技术检测多种碳青霉烯类耐药基因的检测体系和试剂盒

    公开(公告)号:CN118086543A

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202410412429.5

    申请日:2024-04-08

    Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR技术检测多种碳青霉烯类耐药基因的检测体系和试剂盒,所述检测体系包括用于检测碳青霉烯类耐药基因NDM、IMP、VIM、KPC、OXA23LIKE、OXA51LIKE、OXA58LIKE和OXA48LIKE的RPA扩增引物组以及CRISPR系统中识别耐药基因的CrRNA序列。本发明方法操作简单且扩增时不需要温度的变化,不依赖于大型仪器和场地,且设计的特异性扩增引物和CrRNA识别序列可基本覆盖国内流行基因型,简易的恒温装置在40min内就可实现基因的放大和信号识别,为临床早期的干预治疗提供数据支撑,推动抗生素的精准化治疗,提高治愈率以及减少患者住院周期。

    一种基于恒温扩增的肺炎支原体及其耐药基因检测方法

    公开(公告)号:CN118792429A

    公开(公告)日:2024-10-18

    申请号:CN202411184649.3

    申请日:2024-08-27

    Abstract: 本发明提供一种基于恒温扩增的肺炎支原体及其耐药基因检测方法,采用前述引物组合,使用LAMP法对待测样本中包含MP耐药位点的23S rRNA基因片段进行扩增,扩增体系中添加pH指示剂,扩增结束后,当扩增体系颜色由紫色变为黄色,则待测样品为肺炎支原体阳性,当扩增体系颜色保持紫色,则待测样品为肺炎支原体阴性;当S1检测结果为肺炎支原体阳性,将S1得到的扩增产物与DNA探针、银离子及还原剂混合,孵育,形成银纳米簇产生荧光;在540nm激发波长下照射观察,当混合体系未发生荧光猝灭,则待测样品中的肺炎支原体为野生型;当混合体系发生荧光减弱,则待测样品中的肺炎支原体为突变型。该方法可以恒温完成扩增和基因识别,结果可直接通过肉眼进行判读,保持高灵敏度的同时操作更加简便。

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