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公开(公告)号：CN105505849B
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201610046293.6
申请日：2016-01-22
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了联产丁醇与2,3‑丁二醇的基因工程菌，它是导入了乙偶姻还原酶基因的产丁醇梭菌或者导入了乙酰乳酸脱羧酶基因和乙偶姻还原酶基因的产丁醇梭菌，所述的乙酰乳酸脱羧酶基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1～7所示核苷酸序列中的任一种，所述的乙偶姻还原酶基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：8～11所示核苷酸序列中的任一种。本发明通过在丙酮丁醇梭菌中强化乙酰乳酸脱羧反应，将3‑羟基丁酮产量由初始1.8g/L左右大幅提高到6.4g/L左右，进而在乙偶姻还原酶的作用下将乙偶姻转化为高达8.05g/L的2,3‑丁二醇；而丙酮由4.5g/L左右降低至2.2g/L，显著提高了丙酮丁醇梭菌发酵的经济效益。
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公开(公告)号：CN104894048A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510323508.X
申请日：2015-06-12
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明提供了一种提高拜氏梭菌阿魏酸抗逆性的方法，属于基因工程技术领域。该方法是将拜氏梭菌中编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因失活，使该基因在拜氏梭菌中不能正常表达，所述的拜氏梭菌为拜氏梭菌NCIMB？8052，所述的编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因为Cbei_4693，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO：1所示。本发明通过二型内含子基因敲除技术使拜氏梭菌中编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因失活。该重组菌株具有较好的传代稳定性，当培养基中阿魏酸的浓度为0.5g/L时，出发菌株8052丁醇产量为0.7g/L，本发明构建重组菌丁醇产量达5.6g/L，说明通过本发明的方法提高了拜氏梭菌对阿魏酸的抗逆性。
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公开(公告)号：CN106008738B
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201610580986.3
申请日：2016-07-21
Applicant: 南京工业大学
IPC: C08B37/00
Abstract: 本发明提供了一种丙酮丁醇梭菌胞外多糖的提取分离方法，包括如下步骤：(1)将丙酮丁醇梭菌种子液接种到发酵罐中，加入固定化材料，培养至固定化材料表面被丙酮丁醇梭菌生物膜完全覆盖；(2)用碱性溶液溶解丙酮丁醇梭菌的生物膜，离心去除菌体沉淀，向上清液中加入有机溶剂，使有机溶剂的体积分数为30％～90％，所述的有机溶剂为乙醇、丙酮或丁醇，离心，收集沉淀；再加酸调节pH为3.5～10.0，收集沉淀，两次收集的沉淀即为胞外多糖。本发明提供的胞外多糖分离提取方法，具有成本低廉，操作简单的特点。
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公开(公告)号：CN104894048B
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201510323508.X
申请日：2015-06-12
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明提供了一种提高拜氏梭菌阿魏酸抗逆性的方法，属于基因工程技术领域。该方法是将拜氏梭菌中编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因失活，使该基因在拜氏梭菌中不能正常表达，所述的拜氏梭菌为拜氏梭菌NCIMB 8052，所述的编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因为Cbei_4693，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过二型内含子基因敲除技术使拜氏梭菌中编码依赖于NADPH的FMN还原酶基因失活。该重组菌株具有较好的传代稳定性，当培养基中阿魏酸的浓度为0.5g/L时，出发菌株8052丁醇产量为0.7g/L，本发明构建重组菌丁醇产量达5.6g/L，说明通过本发明的方法提高了拜氏梭菌对阿魏酸的抗逆性。
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公开(公告)号：CN106636168A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610973505.5
申请日：2016-11-04
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种调控丙酮丁醇梭菌胞外聚合物合成的方法，其特征在于，该方法是利用二型内含子基因敲除技术在丙酮丁醇梭菌的Spo0A基因中插入内含子序列。本发明提供了一种简单、高效的调控EPS合成的方法，借助此方法得到的重组菌株对EPS具有较高的调控作用，当以葡萄糖为碳源，在100ml厌氧瓶中利用载玻片生物膜培养法培养丙丁菌生物膜时，生物膜厚度为5.81μm，而同等条件培养的出发菌株生物膜厚度达到24.6μm。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107058365A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710122238.5
申请日：2017-03-03
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用同工酶共催化合成2,3‑丁二醇的方法，通过两个以上具有互补性催化优势的2,3‑丁二醇脱氢蛋白(又称2,3‑丁二醇脱氢酶)的共同催化，能够将2,3‑丁二醇的前体高效并且彻底地转化为2,3‑丁二醇。本发明通过同工酶共催化合成2,3‑丁二醇的方法，不仅能够提高2,3‑丁二醇合成的效率，还能够实现其前体物质完全转化，因而能够显著提高细胞代谢网络中2,3‑丁二醇合成支路的通量以及2,3‑丁二醇合成过程的经济性。
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公开(公告)号：CN105505849A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610046293.6
申请日：2016-01-22
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了联产丁醇与2,3-丁二醇的基因工程菌，它是导入了乙偶姻还原酶基因的产丁醇梭菌或者导入了乙酰乳酸脱羧酶基因和乙偶姻还原酶基因的产丁醇梭菌，所述的乙酰乳酸脱羧酶基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1～7所示核苷酸序列中的任一种，所述的乙偶姻还原酶基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO：8～11所示核苷酸序列中的任一种。本发明通过在丙酮丁醇梭菌中强化乙酰乳酸脱羧反应，将3-羟基丁酮产量由初始1.8g/L左右大幅提高到6.4g/L左右，进而在乙偶姻还原酶的作用下将乙偶姻转化为高达8.05g/L的2,3-丁二醇；而丙酮由4.5g/L左右降低至2.2g/L，显著提高了丙酮丁醇梭菌发酵的经济效益。
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公开(公告)号：CN107058365B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201710122238.5
申请日：2017-03-03
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用同工酶共催化合成2,3‑丁二醇的方法，通过两个以上具有互补性催化优势的2,3‑丁二醇脱氢蛋白(又称2,3‑丁二醇脱氢酶)的共同催化，能够将2,3‑丁二醇的前体高效并且彻底地转化为2,3‑丁二醇。本发明通过同工酶共催化合成2,3‑丁二醇的方法，不仅能够提高2,3‑丁二醇合成的效率，还能够实现其前体物质完全转化，因而能够显著提高细胞代谢网络中2,3‑丁二醇合成支路的通量以及2,3‑丁二醇合成过程的经济性。
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公开(公告)号：CN106636168B
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN201610973505.5
申请日：2016-11-04
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种调控丙酮丁醇梭菌胞外聚合物合成的方法，其特征在于，该方法是利用二型内含子基因敲除技术在丙酮丁醇梭菌的Spo0A基因中插入内含子序列。本发明提供了一种简单、高效的调控EPS合成的方法，借助此方法得到的重组菌株对EPS具有较高的调控作用，当以葡萄糖为碳源，在100ml厌氧瓶中利用载玻片生物膜培养法培养丙丁菌生物膜时，生物膜厚度为5.81μm，而同等条件培养的出发菌株生物膜厚度达到24.6μm。
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公开(公告)号：CN106008738A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610580986.3
申请日：2016-07-21
Applicant: 南京工业大学
IPC: C08B37/00
CPC classification number: C08B37/006 , C08B37/0003
Abstract: 本发明提供了一种丙酮丁醇梭菌胞外多糖的提取分离方法，包括如下步骤：(1)将丙酮丁醇梭菌种子液接种到发酵罐中，加入固定化材料，培养至固定化材料表面被丙酮丁醇梭菌生物膜完全覆盖；(2)用碱性溶液溶解丙酮丁醇梭菌的生物膜，离心去除菌体沉淀，向上清液中加入有机溶剂，使有机溶剂的体积分数为30％～90％，所述的有机溶剂为乙醇、丙酮或丁醇，离心，收集沉淀；再加酸调节pH为3.5～10.0，收集沉淀，两次收集的沉淀即为胞外多糖。本发明提供的胞外多糖分离提取方法，具有成本低廉，操作简单的特点。
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