公开(公告)号：CN115725506A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202111023466.X

申请日：2021-09-01

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  闫书平 ,  纪晓霞 ,  谢娜娜 ,  朱斌

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供了大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)过表达ACE2细胞株的构建。包括ACE2载体制备、慢病毒包装、单克隆细胞株筛选及过表达鉴定等。建立了可稳定过表达血管紧张素转化酶2(angiotensin‑converting enzyme 2，ACE2)基因的细胞株，并能稳定传代；并对其进行Western blot验证。结果证实过表达的细胞株已经成功将慢病毒携带的ACE2基因整合至大鼠MSC中，且能在MSC中过量稳定表达，ACE2自发现以来，在其抗炎方面的研究报道较多，但在MSC中的研究报道较少，且ACE2联合MSC在抗炎方面的研究几乎未见报道，本发明基于MSC、慢病毒包装等技术首次成功构建出的MSC过表达ACE2稳定株，对ACE2在在各种炎症性疾病的研究及治疗提供了高价值的生物学材料；对包括冠状病毒在内的多种病原所致的炎症性病变的研究具有重要的生物学意义。

公开(公告)号：CN113969294A

公开(公告)日：2022-01-25

申请号：CN202010727641.2

申请日：2020-07-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李帅 ,  王换换 ,  叶平生 ,  付亚丽 ,  谢娜娜

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及可以表达外源鸭ACE2的重组质粒pcDNA3.1‑ACE2的构建以及鉴定，以及CHO细胞G418压力筛选浓度的确定，通过稳定转染将该重组质粒转染进CHO内，在G418压力筛选下，借助免疫荧光及Western‑blot技术构建了可以表达外源ACE2蛋白的重组CHO细胞系。

公开(公告)号：CN112301053A

公开(公告)日：2021-02-02

申请号：CN202011135194.8

申请日：2020-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 闫书平 ,  张源淑 ,  王换换 ,  谢娜娜 ,  朱斌 ,  付亚丽

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了小鼠ACE2基因真核表达质粒pVAX1‑ACE2。提供了ACE2基因过表达质粒，构建了ACE2真核表达载体，并对其进行细胞验证。验证后的过表达载体，能稳定存在小鼠乳腺上皮细胞中，且过量表达ACE2蛋白，为后续其在乳腺炎发生发展中的治疗作用奠定基础。ACE2自发现以来，对其多种功能进行了研究，ACE2作为一种强有力的负调节分子，平衡ACE的多种功能，通过靶向降解AngII，在全身各器官中表现出了保护性的作用；其次，作为SARS冠状病毒的必要受体，下调ACE2能够诱发严重的肺衰竭；ACE2和它的同源物Collectrin都同氨基酸转运载体相联系，分别在肾脏和肠道氨基酸吸收中起重要的作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大。

公开(公告)号：CN115725505A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202111023250.3

申请日：2021-09-01

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李志强 ,  张崇昊 ,  纪晓霞 ,  曹西月 ,  闫书平 ,  谢娜娜

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/57

Abstract: 本发明提供一株IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株的细胞系及构建方法，包括ACE2基因敲除载体设计、制备、慢病毒包装、单克隆株筛选及敲除分析等并获得ACE2基因敲除稳定细胞系。ACE2在抗炎及纤维化、肠道物质吸收转运及作为SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2的功能性受体，调控ACE2对机体健康意义重大。目前未有商品化IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，在一定程度上限制ACE2在猪肠道健康领域的研究。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建出IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，为在动物尤其在猪上的研究提供高价值的生物材料，对猪肠道健康的研究具有重要的生物学意义。

公开(公告)号：CN115308410A

公开(公告)日：2022-11-08

申请号：CN202110492509.2

申请日：2021-05-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李帅 ,  谢娜娜 ,  纪晓霞 ,  朱斌 ,  张崇昊

IPC: G01N33/573 ,  G01N33/543 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及一种鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA快速检测试剂盒以及对鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)检测方法。本发明具有定量、检测浓度范围大、重复性好、操作简便等优点。

公开(公告)号：CN113564148A

公开(公告)日：2021-10-29

申请号：CN202010359858.2

申请日：2020-04-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  闫书平 ,  杨维维 ,  何晟 ,  谢娜娜 ,  陈希

IPC: C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66 ,  C07K16/40

Abstract: 本发明提供了山羊ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列，构建了ACE2原核表达载体，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体，并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2自发现以来，对其多种功能进行了研究，ACE2作为一种强有力的负调节分子，平衡ACE的多种功能，通过靶向降解AngII，在全身各器官中表现出了保护性的作用；其次，作为SARS冠状病毒的必要受体，下调ACE2能够诱发严重的肺衰竭；ACE2和它的同源物Collectrin都同氨基酸转运载体相联系，分别在肾脏和肠道氨基酸吸收中起重要的作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

公开(公告)号：CN112266933A

公开(公告)日：2021-01-26

申请号：CN202011135193.3

申请日：2020-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 李志强 ,  张源淑 ,  王换换 ,  张崇昊 ,  曹西月 ,  谢娜娜 ,  付亚丽

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种猪ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，通过G418筛选出稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白。本发明具有：①快速：仅需1小时反应时间；②简单：不受片段酶切位点的影响，无需酶切；③高效：阳性率达95％以上；④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2通过靶向降解AngII发挥舒张血管、抑制炎症及抗纤维化等多种机体保护功能；同时作为严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)的功能性受体，其临床意义非凡。本发明为深入研究猪ACE2作为潜在的病毒受体在猪冠状病毒感染中发挥的生物学功能及分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。