公开(公告)号：CN113969294A

公开(公告)日：2022-01-25

申请号：CN202010727641.2

申请日：2020-07-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  李帅 ,  王换换 ,  叶平生 ,  付亚丽 ,  谢娜娜

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及可以表达外源鸭ACE2的重组质粒pcDNA3.1‑ACE2的构建以及鉴定，以及CHO细胞G418压力筛选浓度的确定，通过稳定转染将该重组质粒转染进CHO内，在G418压力筛选下，借助免疫荧光及Western‑blot技术构建了可以表达外源ACE2蛋白的重组CHO细胞系。

公开(公告)号：CN112301053A

公开(公告)日：2021-02-02

申请号：CN202011135194.8

申请日：2020-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 闫书平 ,  张源淑 ,  王换换 ,  谢娜娜 ,  朱斌 ,  付亚丽

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明提供了小鼠ACE2基因真核表达质粒pVAX1‑ACE2。提供了ACE2基因过表达质粒，构建了ACE2真核表达载体，并对其进行细胞验证。验证后的过表达载体，能稳定存在小鼠乳腺上皮细胞中，且过量表达ACE2蛋白，为后续其在乳腺炎发生发展中的治疗作用奠定基础。ACE2自发现以来，对其多种功能进行了研究，ACE2作为一种强有力的负调节分子，平衡ACE的多种功能，通过靶向降解AngII，在全身各器官中表现出了保护性的作用；其次，作为SARS冠状病毒的必要受体，下调ACE2能够诱发严重的肺衰竭；ACE2和它的同源物Collectrin都同氨基酸转运载体相联系，分别在肾脏和肠道氨基酸吸收中起重要的作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大。

公开(公告)号：CN113567671A

公开(公告)日：2021-10-29

申请号：CN202010359917.6

申请日：2020-04-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张源淑 ,  肖航 ,  李志强 ,  朱斌 ,  付亚丽 ,  陈希

IPC: G01N33/573 ,  C07K16/40 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了猪ACE2多克隆抗体的制备，构建了ACE2原核表达载体，利用大肠杆菌原核表达系统表达ACE2蛋白，并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体，并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2作为RAS系统新的调节因子，通过靶向降解Ang II，发挥舒张血管、抑制炎症及抗纤维化等机体保护功能；作为急性严重呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)主要功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与氨基酸吸收不良、肠道微生态平衡和胃肠道炎症发挥重要作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

公开(公告)号：CN112266933A

公开(公告)日：2021-01-26

申请号：CN202011135193.3

申请日：2020-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 李志强 ,  张源淑 ,  王换换 ,  张崇昊 ,  曹西月 ,  谢娜娜 ,  付亚丽

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N9/48 ,  C12N15/57 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种猪ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，通过G418筛选出稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白。本发明具有：①快速：仅需1小时反应时间；②简单：不受片段酶切位点的影响，无需酶切；③高效：阳性率达95％以上；④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2通过靶向降解AngII发挥舒张血管、抑制炎症及抗纤维化等多种机体保护功能；同时作为严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)的功能性受体，其临床意义非凡。本发明为深入研究猪ACE2作为潜在的病毒受体在猪冠状病毒感染中发挥的生物学功能及分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。