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公开(公告)号：CN115725505A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202111023250.3
申请日：2021-09-01
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/57
Abstract: 本发明提供一株IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株的细胞系及构建方法，包括ACE2基因敲除载体设计、制备、慢病毒包装、单克隆株筛选及敲除分析等并获得ACE2基因敲除稳定细胞系。ACE2在抗炎及纤维化、肠道物质吸收转运及作为SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2的功能性受体，调控ACE2对机体健康意义重大。目前未有商品化IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，在一定程度上限制ACE2在猪肠道健康领域的研究。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建出IPEC‑J2细胞ACE2基因敲除稳定株，为在动物尤其在猪上的研究提供高价值的生物材料，对猪肠道健康的研究具有重要的生物学意义。
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公开(公告)号：CN112501200A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011135191.4
申请日：2020-10-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种鸡ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，筛选稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白并测定酶活。本发明具有：①快速：仅需要1小时②简单：无需酶切③高效：阳性率达95％以上④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2具有抗炎、抗损伤、抗纤维化等机体保护功能，特别作为SARS‑CoV和SARS‑CoV‑2主要功能性受体，具有保护肺损伤功能。目前缺乏生物活性的鸡ACE2蛋白，限制了其生物学功能的研究。本发明为深入研究鸡ACE2作为病毒受体在禽冠状病毒感染中发挥的生物学功能及其分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用的意义都是十分重大的。
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公开(公告)号：CN116027037A
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202111251060.7
申请日：2021-10-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/573 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 针对目前尚无检测禽类ACE2检测试剂盒的现状，本发明涉及一种鸡ACE2双抗体夹心ELISA检测试剂盒及检测方法，试剂盒包括：包被有抗鸡ACE2蛋白多克隆抗体的酶标板、封闭液、HRP标记兔抗鸡ACE2多克隆抗体、浓缩洗涤液、显色液、终止液、标准品。本发明鸡ACE2双抗体夹心ELISA检测周期短、操作简便、灵敏度高、特异性强，设备要求简单，能定量分析，且试剂盒可以实现大批量样本的快速检测。ACE2作为RAS系统负调节分子，可降解AngII，发挥抗损伤、抗纤维化等机体保护功能；作为SARS‑CoV‑2功能性受体，具有保护肺损伤的功能；ACE2协同氨基酸转运载体转运，与胃肠道炎症发挥重要作用，因此ACE2含量的微小变化会直接或间接影响动物机体的健康。所以本发明为ACE2的定量提供一种可供选择的检测方法。
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公开(公告)号：CN112266933A
公开(公告)日：2021-01-26
申请号：CN202011135193.3
申请日：2020-10-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种猪ACE2真核表达重组质粒载体的构建、鉴定与表达方法，包括构建ACE2真核表达载体，转染CHO细胞，通过G418筛选出稳定表达的pcDNA.3.1(+)‑ACE2细胞株，获得具有生物学活性的ACE2蛋白。本发明具有：①快速：仅需1小时反应时间；②简单：不受片段酶切位点的影响，无需酶切；③高效：阳性率达95％以上；④无缝：不引入额外序列等优点。ACE2通过靶向降解AngII发挥舒张血管、抑制炎症及抗纤维化等多种机体保护功能；同时作为严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS‑CoV)的功能性受体，其临床意义非凡。本发明为深入研究猪ACE2作为潜在的病毒受体在猪冠状病毒感染中发挥的生物学功能及分子机制，开发以ACE2为冠状病毒靶向治疗药物奠定基础。
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