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公开(公告)号：CN117660299A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311450738.3
申请日：2023-11-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种PEDV高嗜性单克隆细胞株及其应用，该细胞株Vero‑B6于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为：CGMCC NO.45622。本发明筛选出一株对PEDV易感的Vero细胞，对筛选出来的Vero‑B6细胞系的相关特性做系列的鉴定，结果显示，Vero‑B6细胞传代到25代，每一代细胞均能贴壁良好，细胞传代稳定，接种PEDV后，发现对PEDV的易感性也比较稳定，说明细胞特性在传代过程中保持稳定，且该细胞不含细菌、真菌、支原体及某些外源病毒污染，该细胞系可用于实验室病原和疫苗相关研究。
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公开(公告)号：CN115927745A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210943330.9
申请日：2022-08-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测6种猪冠状病毒的RT‑PCR检测方法。本发明的检测方法可用于检测6种猪冠状病毒，实验结果表明，本发明的方法通过一对引物即可检测6种猪源冠状病毒的核酸，提高了检测效率，可节省检测的费用，对于临床发病猪未知样品检测具有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN107841507B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201711177363.2
申请日：2017-11-23
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap‑穿膜肽融合蛋白基因及其应用，该融合蛋白的编码基因为(1)～(3)中的任意一种：(1)融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因；(2)融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因；(3)融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因。本课题组研究发现，穿膜肽与pVAX‑Cap质粒混合制备的DNA疫苗能提高其在小鼠体内的免疫应答水平。本研究将TAT、ppTG20，HBM与PCV2 Cap蛋白N端融合，成功构建重组杆状病毒，实现了Cap蛋白有效表达，为PCV2基因工程疫苗研究奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106511991B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201611139167.1
申请日：2016-12-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K39/215 , A61K39/39 , A61K48/00 , A61P31/14 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及基因疫苗技术领域，特别涉及一种Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用，Ii基因碱基序列见序列表中序列8。将Ii基因载体和S1（m）基因载体混合或者将Ii基因与S1（m）基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备，S1（m）基因碱基序列见序列表中序列10。在经密码子优化的S1基因的基础上，成功构建了真核表达质粒pVAX‑S1（m）和pVAX‑Ii‑S1（m），小鼠免疫试验验证S1蛋白的免疫原性和Ii作为分子佐剂在提高体液和细胞免疫中发挥的作用，首免后63d出现特异性抗体，首免后84d抗体明显升高，为研制PEDV疫苗提出新的思路，为猪体试验奠定了基础。
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公开(公告)号：CN102698289A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210165822.6
申请日：2012-05-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了PABP抑制剂在制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物中的应用。所述的PABP抑制剂为表达PABP shRNA的重组质粒,优选以pSUPER为出发载体，含有表达PABP shRNA的DNA模板序列。本发明成功构建并筛选了以pSUPER为载体，可以表达靶向PABP的小发卡RNA的重组质粒。将这种质粒转染到Marc-145细胞后接种PRRSV，发现干扰PABP表达之后，PRRSV的mRNA水平比对照组有所下降，免疫荧光结果显示N蛋白表达也比对照组有所减弱。可见通过抑制PABP表达，能够减弱PRRSV N蛋白的表达，从而实现对PRRSV的抑制。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101665781B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN200910181983.2
申请日：2009-08-06
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明高滴度猪圆环病毒2型(PCV2)培养细胞、制备方法及其用法，属于生物技术领域。为获得能稳定产生高滴度PCV2的PK15细胞系，对PK15母细胞进行有限稀释后进行了连续的细胞克隆和亚克隆，利用IFA筛选，获得1株对PCV2具有高敏感性的PK15-B1细胞系。该细胞系生物学特性稳定，无外源微生物污染。该细胞接种100TCID50/ml PCV2后，37℃培养3-4天，病毒滴度达107.0TCID50/ml，比接种PK15母细胞的病毒滴度高100倍，表明PK15-B1细胞系对PCV2更为敏感，更利于PCV2的复制。本研究筛选的PK15-B1克隆细胞株及高滴度PCV2制备方法可用于PCV2疫苗和相关诊断试剂的研究与产品生产。
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公开(公告)号：CN101240264A
公开(公告)日：2008-08-13
申请号：CN200810024423.1
申请日：2008-03-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗(SH株)，属于生物技术领域。猪圆环病毒2型毒株SH属于圆环病毒科圆环病毒属，已在中国科学院武汉病毒研究所进行保藏，保藏日期：，保藏号为。2002年从上海地区发生严重的断奶仔猪多系统衰竭综合症的猪场采集病料，进行病毒分离、鉴定、纯化获得了纯化的PCV2病毒的上海分离株SH。将PCV2－SH株在PK－15细胞中大量增殖，经甲醛灭活加入白油佐剂进行乳化，制备常规的白油佐剂疫苗。实验室试制成功5批疫苗，猪体试验证明具有较好安全性，并可以诱导猪体产生免疫保护效果，并起草制定了疫苗生产和检验规程。通过各方面实验证明该灭活疫苗已完全符合国家生物制品标准。
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公开(公告)号：CN1328373C
公开(公告)日：2007-07-25
申请号：CN200510038694.9
申请日：2005-04-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/235 , A61P31/12
Abstract: 本发明猪II型圆环病毒(PCV-2)重组腺病毒，属于高新生物技术领域。通过PCR技术扩增PCV-2编码Cap蛋白的ORF2全基因序列，并把该基因序列克隆入腺病毒载体系统的穿梭载体pShuttle-CMV中，与腺病毒载体系统的骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183菌株获得重组质粒，重组质粒转染HEK293-A细胞获得了重组腺病毒并成功的进行了噬斑纯化，通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot和IPMA证明构建成功表达了PCV-2 Cap蛋白的重组腺病毒rAd-Cap。在该重组毒中可以使PCV-2的Cap蛋白获得正确表达和表达量提高，从而能更有效的刺激机体的免疫保护反应。
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公开(公告)号：CN119979482A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202411970800.6
申请日：2024-12-30
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种PDCoV JS2021‑LX毒株NS6基因缺失重组病毒及其构建方法，基于BAC系统成功构建的PDCoV JS2021‑LX毒株感染性克隆，采用CRISPR/Cas9技术对其NS6基因的上下游进行切割，之后通过同源重组的方式将原NS6基因片段替换成绿色荧光蛋白EGFP，得到NS6基因缺失的重组质粒，转染LLC‑PK1细胞后拯救出缺失NS6蛋白的重组病毒。本发明成功拯救出了一株PDCoV NS6基因缺失的重组病毒，通过体内和体外两方面评估重组病毒和拯救病毒的病毒复制水平，猪体实验结果表明，该重组病毒致病性降低，具有作为弱毒活疫苗候选毒株的潜力。
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公开(公告)号：CN111154917B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN202010109705.2
申请日：2020-02-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及生物毒株鉴别技术领域，具体公开了鉴别猪伪狂犬病毒变异毒株的PCR引物及方法，提取待鉴别病毒DNA，采用本发明设计的引物进行第一步扩增，扩增出两条条带的为变异株或HB98疫苗毒株，扩增出1条条带的为经典毒株；扩增出两条条带的病毒DNA再进行第二步扩增，扩增产物分子量大小为211bp的为变异株,扩增产物分子量大小为293bp的为HB98疫苗毒株。第一步PCR的敏感度可以达到10TCID50病毒量或0.01ng/ml质粒量，而第二步PCR敏感度达到10TCID50病毒量或者0.1ng/ml质粒量。该敏感度可以有效的检测出临床病料中是否有伪狂犬病毒感染，并区分出伪狂犬病毒经典毒株或者变异毒株感染，并且准确率高。
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