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公开(公告)号：CN104046637B
公开(公告)日：2017-04-12
申请号：CN201410315228.X
申请日：2014-07-03
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/50 , C12N15/63 , C12N5/10 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开一种猪流行性腹泻病毒新变异毒株重组S1蛋白及其亚单位疫苗，该蛋白系将含有KDEL3基因序列、缺失III区的铜绿假单胞菌外毒素A基因序列和S1(m)基因序列的融合基因片段PE(△III)‑S1(m)‑KDEL3克隆至杆状病毒载体中获得重组载体，将所述的重组载体阳转DH10Bac感受态细胞进行重组载体位点特异性转座获得重组杆状质粒，将该重组杆状质粒在脂质体介导下转染Sf9细胞获得重组Sf9细胞，经该重组Sf9细胞表达获得。本发明在对S1基因哺乳动物密码子偏嗜性优化的基础上，首次利用杆状病毒表达系统表达PE(△III)‑S1(m)‑KDEL3融合蛋白，以期获得正确并高效表达融合蛋白的重组杆状病毒。经IFA和Western blot验证重组杆状病毒可正确表达融合蛋白且融合蛋白具有良好的反应原性。
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公开(公告)号：CN106511991A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611139167.1
申请日：2016-12-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K39/215 , A61K39/39 , A61K48/00 , A61P31/14 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及基因疫苗技术领域，特别涉及一种Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用，Ii基因碱基序列见序列表中序列8。将Ii基因载体和S1（m）基因载体混合或者将Ii基因与S1（m）基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备，S1（m）基因碱基序列见序列表中序列10。在经密码子优化的S1基因的基础上，成功构建了真核表达质粒pVAX-S1（m）和pVAX-Ii-S1m），小鼠免疫试验验证S1蛋白的免疫原性和Ii作为分子佐剂在提高体液和细胞免疫中发挥的作用，首免后63d出现特异性抗体，首免后84d抗体明显升高，为研制PEDV疫苗提出新的思路，为猪体试验奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106511991B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201611139167.1
申请日：2016-12-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: A61K39/215 , A61K39/39 , A61K48/00 , A61P31/14 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及基因疫苗技术领域，特别涉及一种Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用，Ii基因碱基序列见序列表中序列8。将Ii基因载体和S1（m）基因载体混合或者将Ii基因与S1（m）基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备，S1（m）基因碱基序列见序列表中序列10。在经密码子优化的S1基因的基础上，成功构建了真核表达质粒pVAX‑S1（m）和pVAX‑Ii‑S1（m），小鼠免疫试验验证S1蛋白的免疫原性和Ii作为分子佐剂在提高体液和细胞免疫中发挥的作用，首免后63d出现特异性抗体，首免后84d抗体明显升高，为研制PEDV疫苗提出新的思路，为猪体试验奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104046637A
公开(公告)日：2014-09-17
申请号：CN201410315228.X
申请日：2014-07-03
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/50 , C12N15/63 , C12N5/10 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开一种猪流行性腹泻病毒新变异毒株重组S1蛋白及其亚单位疫苗，该蛋白系将含有KDEL3基因序列、缺失III区的铜绿假单胞菌外毒素A基因序列和S1(m)基因序列的融合基因片段PE(△III)-S1(m)-KDEL3克隆至杆状病毒载体中获得重组载体，将所述的重组载体阳转DH10Bac感受态细胞进行重组载体位点特异性转座获得重组杆状质粒，将该重组杆状质粒在脂质体介导下转染Sf9细胞获得重组Sf9细胞，经该重组Sf9细胞表达获得。本发明在对S1基因哺乳动物密码子偏嗜性优化的基础上，首次利用杆状病毒表达系统表达PE(△III)-S1(m)-KDEL3融合蛋白，以期获得正确并高效表达融合蛋白的重组杆状病毒。经IFA和Western blot验证重组杆状病毒可正确表达融合蛋白且融合蛋白具有良好的反应原性。
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