公开(公告)号：CN106367382A

公开(公告)日：2017-02-01

申请号：CN201610826211.X

申请日：2016-09-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黎相广 ,  王修启 ,  高春起 ,  严会超 ,  朱敏 ,  周加义

IPC: C12N5/071

CPC classification number: C12N5/0679 ,  C12N2500/30 ,  C12N2500/32 ,  C12N2501/11 ,  C12N2501/415 ,  C12N2501/998

Abstract: 本发明公开了一种促进猪肠道隐窝细胞体外扩增的培养基，其组成为：Advanced DMEM/F12培养液中含有100～200 ng/mL Wnt3a、1～2% N2、1～2% B27、0.5～1 mmol/L N-乙酰-半胱氨酸、1～2 mmol/L L-谷氨酰胺、5～10 μmol/L SB202190、0.5～1 μmol/L LY2157299、50～100 ng/mL EGF、100～200 ng/mL Noggin和500～1000 ng/mL R-Spondin 1；通过组分的筛选和含量的优化，该培养基能够成功用于猪肠道隐窝单细胞的体外培养，另外通过制备CDX2条件性培养基，优化其在猪肠道隐窝细胞培养中的用量和使用方法，以达到促进猪肠道隐窝细胞体外扩增的目的。

公开(公告)号：CN104725511A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510082966.9

申请日：2015-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黎相广 ,  王修启 ,  高春起 ,  严会超 ,  傅厚龙 ,  翟振亚 ,  陈明霞

IPC: C07K16/28 ,  C12N5/074

Abstract: 本发明属于细胞分离技术领域，具体公开了一种猪肠道干细胞的分离培养方法；本发明首先筛选可用于猪肠道干细胞分选的特异性抗体，所述抗体包括CD24、CD44和CD166，所述CD24抗体来源于ML5单克隆；利用该抗体，通过流式细胞技术可针对性的筛选出猪肠道干细胞，通过建立三维的培养体系，可培养出类肠团，本发明为肠道上皮更新研究和组织特异性干细胞移植提供良好的材料。

公开(公告)号：CN104745525B

公开(公告)日：2018-03-06

申请号：CN201510080396.X

申请日：2015-02-15

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王喆 ,  王修启 ,  黎相广 ,  高春起 ,  严会超 ,  傅厚龙 ,  陈明霞 ,  翟振亚 ,  范宏博

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明属于组织分离技术领域，具体公开了一种用于分离猪肠道隐窝的分离液及其分离方法，该分离液包括以下浓度各组分：5.0～10.0mM HEPES；5.0～30.0 mM Na2EDTA‑2H2O；0.50～1.0 mM DTT；0.25～0.50 mM BSA；2.5～3.0 mM 葡萄糖；0.5～2.5 mM谷氨酰胺；0.50～1.0 mM DL‑β‑羟丁酸钠；2～10 mM Y‑27632；1.5～2.7 mM KCl；1.0～1.5 mM KH2PO4；130～138 mM NaCl；5～8 mM Na2HPO4‑7H2O；在低温条件下仔猪小肠通过上述分离液和HBSS的配合获得结构完整、活性和纯度都较高的猪肠道隐窝。

公开(公告)号：CN104745525A

公开(公告)日：2015-07-01

申请号：CN201510080396.X

申请日：2015-02-15

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王修启 ,  黎相广 ,  高春起 ,  严会超 ,  傅厚龙 ,  陈明霞 ,  翟振亚 ,  范宏博

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明属于组织分离技术领域，具体公开了一种用于分离猪肠道隐窝的分离液及其分离方法，该分离液包括以下浓度各组分：5.0～10.0mM HEPES；5.0～30.0 mM Na2EDTA-2H2O；0.50～1.0 mM DTT；0.25～0.50 mM BSA；2.5～3.0 mM 葡萄糖；0.5～2.5 mM谷氨酰胺；0.50～1.0 mM DL-β-羟丁酸钠；2～10 mM Y-27632；1.5～2.7 mM KCl；1.0～1.5 mM KH2PO4；130～138 mM NaCl；5～8 mM Na2HPO4-7H2O；在低温条件下仔猪小肠通过上述分离液和HBSS的配合获得结构完整、活性和纯度都较高的猪肠道隐窝。

公开(公告)号：CN102925446A

公开(公告)日：2013-02-13

申请号：CN201210257217.1

申请日：2012-07-24

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王修启 ,  黎相广

IPC: C12N15/12

Abstract: 本发明公开了三种基因，其表达与鸡胚体及其小肠重量高度相关，这三种基因是鸡胚小肠中碱性氨基酸转运载体b0,+AT基因、酸性氨基酸转运载体EAAT3基因和寡肽转运载体PepT1基因。通过本发明三种基因可以准确灵敏地反映鸡胚及其小肠的发育水平。

公开(公告)号：CN104725511B

公开(公告)日：2018-01-12

申请号：CN201510082966.9

申请日：2015-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 黎相广 ,  王喆 ,  王修启 ,  高春起 ,  严会超 ,  傅厚龙 ,  翟振亚 ,  陈明霞

IPC: C07K16/28 ,  C12N5/074

Abstract: 本发明属于细胞分离技术领域，具体公开了一种猪肠道干细胞的分离培养方法；本发明首先筛选可用于猪肠道干细胞分选的特异性抗体，所述抗体包括CD24、CD44和CD166，所述CD24抗体来源于ML5单克隆；利用该抗体，通过流式细胞技术可针对性的筛选出猪肠道干细胞，通过建立三维的培养体系，可培养出类肠团，本发明为肠道上皮更新研究和组织特异性干细胞移植提供良好的材料。