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公开(公告)号：CN103014157B
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201210518233.1
申请日：2012-12-05
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种用单条线虫虫体或单个线虫虫卵鉴定植物寄生线虫的方法，属于分子生物学检测鉴定技术领域。在分子生物学实验中由于线虫个体小，在提取单条线虫DNA模板的过程中存在容易混入其它试剂污染或者将单条线虫切断处理过程中易发生材料损失严重。本发明包含了一步直接在PCR管中简单刺破线虫虫体或虫卵的操作，不需要进行把线虫裂解液从其它载体转移到PCR管中，这样保证了线虫及其裂解物的存在，即DNA模板的存在，模板制备效率高。本发明对目前在植物寄生线虫鉴定研究等多个方面的分子诊断标记进行了PCR验证和部分进一步的酶切实验验证，效果显著。本发明还首次公布了用单个线虫虫卵作为模板进行植物寄生线虫的鉴定。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103014157A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210518233.1
申请日：2012-12-05
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种用单条线虫虫体或单个线虫虫卵鉴定植物寄生线虫的方法，属于分子生物学检测鉴定技术领域。在分子生物学实验中由于线虫个体小，在提取单条线虫DNA模板的过程中存在容易混入其它试剂污染或者将单条线虫切断处理过程中易发生材料损失严重。本发明包含了一步直接在PCR管中简单刺破线虫虫体或虫卵的操作，不需要进行把线虫裂解液从其它载体转移到PCR管中，这样保证了线虫及其裂解物的存在，即DNA模板的存在，模板制备效率高。本发明对目前在植物寄生线虫鉴定研究等多个方面的分子诊断标记进行了PCR验证和部分进一步的酶切实验验证，效果显著。本发明还首次公布了用单个线虫虫卵作为模板进行植物寄生线虫的鉴定。
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公开(公告)号：CN105483119A
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201511006217.4
申请日：2015-12-25
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6806 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明属于分子生物学检测鉴定技术领域，具体涉及一种固定线虫单条虫DNA粗提液及其制备方法与应用。本发明通过线虫样品的洗涤、固定线虫样品的裂解以及DNA粗提液的制备等步骤，制备得到固定线虫单条虫DNA粗提液，该提取液进一步进行PCR扩增并检测，条带清晰，结果可靠，准确性、灵敏度和特异性高，操作简单，成本低，可用于线虫的分子鉴定。对于其他已固定植物寄生线虫的分子鉴定具有重要的理论依据和指导意义。
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公开(公告)号：CN102487901B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110400373.4
申请日：2011-12-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/033 , A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种利用无外源培养基培养的空心菜离体根系单异体繁殖根结线虫的方法，该方法包括以下步骤：(1)制备空心菜离体根系：将空心菜种子接种到1％水琼脂培养基平板上，待种子萌发的根系长到3-4cm时，切取根尖，将根尖接种到无外源离体根系培养基平板上，15～20d长出大量的离体根；(2)根结线虫的接种和培养：将根结线虫卵囊制备成卵粒悬浮液接种在步骤(1)的空心菜离体根上，培养50～90d即可得到大量单一的根结线虫。本发明方法繁殖率高、操作简单、不易污染、应用范围广、实用性强，解决了难以获得纯化的大量根结线虫的问题，且避免了盆栽实生苗接种繁殖根结线虫方法的费时、占据大量空间、受季节等自然和环境条件限制以及易被其他生物污染等不足。
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公开(公告)号：CN102487901A
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201110400373.4
申请日：2011-12-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: A01K67/033 , A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种利用无外源培养基培养的空心菜离体根系单异体繁殖根结线虫的方法，该方法包括以下步骤：(1)制备空心菜离体根系：将空心菜种子接种到1％水琼脂培养基平板上，待种子萌发的根系长到3-4cm时，切取根尖，将根尖接种到无外源离体根系培养基平板上，15～20d长出大量的离体根；(2)根结线虫的接种和培养：将根结线虫卵囊制备成卵粒悬浮液接种在步骤(1)的空心菜离体根上，培养50～90d即可得到大量单一的根结线虫。本发明方法繁殖率高、操作简单、不易污染、应用范围广、实用性强，解决了难以获得纯化的大量根结线虫的问题，且避免了盆栽实生苗接种繁殖根结线虫方法的费时、占据大量空间、受季节等自然和环境条件限制以及易被其他生物污染等不足。
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公开(公告)号：CN102703582A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210072011.1
申请日：2012-03-19
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法，是先提取待检测样品中的DNA，经过Promega公司的WizardDNAClean-upSystems试剂盒纯化后作为模板，以SEQ ID NO:1～2所示序列为引物进行PCR扩增，如果能够扩增出518bp的目的条带，则证明待检测样品中含有香蕉穿孔线虫。该方法适用于香蕉栽培土壤或其他基质的检测，检测结果准确，灵敏度高，适用范围广，应用前景广阔。
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