公开(公告)号：CN116590241A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310089247.4

申请日：2023-02-06

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心

Inventor： 向程威 ,  杨泽坤 ,  王婷 ,  杨洁 ,  陈瑞爱

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  A61K39/245 ,  A61K39/12 ,  A61P31/22 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种E基因突变的重组鸭坦布苏病毒及其制备方法、疫苗。本发明制备了突变质粒E DⅠD37N R166K，进而构建了E基因突变的重组鸭坦布苏病毒株rDTMUV E DⅠD37N R166K。该毒株可为后续抗鸭坦布苏病毒的药物、疫苗的制备提供了良好的平台。

公开(公告)号：CN116286883A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310088909.6

申请日：2023-02-06

Applicant: 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 ,  华南农业大学

Inventor： 向程威 ,  杨泽坤 ,  王婷 ,  杨洁 ,  陈瑞爱

IPC: C12N15/40 ,  C12N7/01 ,  A61K39/245 ,  A61K39/12 ,  A61P31/22 ,  A61P31/14 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种突变鸭坦布苏病毒株及其构建方法、应用。本发明通过特定的引物组合，构建了定点突变E基因的突变质粒EDII+III E89G V312A，进而构建了突变鸭坦布苏病毒株rDTMUV EDII+III E89G V312A。该毒株可为后续抗鸭坦布苏病毒的药物、疫苗的制备提供了良好的平台。

公开(公告)号：CN115074389A

公开(公告)日：2022-09-20

申请号：CN202210661981.9

申请日：2022-06-13

Applicant: 华南农业大学 ,  华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司

Inventor： 陈瑞爱 ,  杨泽坤 ,  向程威 ,  黄梅 ,  王婷 ,  杨洁 ,  徐婷

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/11 ,  C12N15/66 ,  C12N15/40 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/70 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的细胞系的构建方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该构建方法包括：(1)采用构建重组质粒；(2)采用所述重组质粒转染细胞，得到重组细胞；(3)将重组细胞和慢病毒包装质粒共同培养，得到慢病毒样颗粒的培养液；(4)将慢病毒样颗粒的培养液感染宿主细胞，筛选得到稳定株，培养后获得细胞系。实施本发明，可稳定提升NS1mRNA和蛋白的表达水平。

公开(公告)号：CN113817764A

公开(公告)日：2021-12-21

申请号：CN202111261808.1

申请日：2021-10-28

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 陈瑞爱 ,  兰虹 ,  熊挺 ,  何献铭 ,  杨泽坤

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/34 ,  C07K14/075 ,  C12N1/21 ,  C07K1/22 ,  A61K39/235 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种I群4型禽腺病毒Fiber‑2蛋白的制备及应用。所述制备方法包括：以FAdV‑4毒株DNA为模板，设计引物扩增出fiber2序列，测序正确后，将fiber2序列进行密码子优化，然后将其构建到pMal‑c2X载体上，得到重组质粒pMal‑c2X‑FAV4‑fiber2；最后转化大肠杆菌BL21进行诱导表达，得到I群4型禽腺病毒Fiber‑2蛋白。本发明方法只需要在37℃诱导3h即可，时间短，操作简单，其表达的目的蛋白是有利于纯化的可溶性蛋白，只需要一步镍柱层析，便可获得大量目的蛋白，而且成本低，易放大。

公开(公告)号：CN118834294A

公开(公告)日：2024-10-25

申请号：CN202411075423.X

申请日：2024-08-07

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心

Inventor： 冯海霞 ,  杨泽坤 ,  王琼洁 ,  陈思璇 ,  李佳慧 ,  徐飞 ,  韩银 ,  陈瑞爱

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明属于生物领域，公开了一种鸭坦布苏病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备方法，将经过优化的DTMUV NS1基因与载体连接构成重组质粒；所述DTMUV NS1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；将重组质粒转化进入BL21(DE3)感受态细胞，并收获DTMUV NS1蛋白；将DTMUV NS1蛋白纯化并免疫小鼠，采集小鼠脾细胞；将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0混合培养，筛选分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞；将杂交瘤细胞注射进入小鼠体内，获得NS1蛋白单克隆抗体。该方法制备得到的NS1蛋白单克隆抗体效价较高，可达1:512,000，并且可以用于病毒诊断，如WB，IFA，具有精准高效的特点，日后可以应用于试剂盒检测，药物制备的方面，为坦布苏病毒的机制研究，疾病诊断及防控奠定基础。同时，本发明还提供了基于该方法制备得到的NS1蛋白单克隆抗体的应用和检测试剂盒。