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公开(公告)号：CN110499336B
公开(公告)日：2021-10-12
申请号：CN201910782039.6
申请日：2019-08-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/90
Abstract: 本公开涉及基因工程技术领域，特别涉及一种利用小分子化合物提高基因组定点修饰效率的方法。该方法通过CRISPR/Cas9系统与小分子化合物共同作用于细胞来实现。具体地为，CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段，可以定点识别目的基因，并使目的基因发生双链断裂，而在断裂处，小分子化合物发挥作用，进行同源重组修复，高效的完成基因组定点修饰，经小分子化合物处理的细胞基因组定点修饰效率显著提高。
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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN110846297A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170441.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶，葡聚糖酶和纤维素酶，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号：CN110499336A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910782039.6
申请日：2019-08-23
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/90
Abstract: 本公开涉及基因工程技术领域，特别涉及一种利用小分子化合物提高基因组定点修饰效率的方法。该方法通过CRISPR/Cas9系统与小分子化合物共同作用于细胞来实现。具体地为，CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段，可以定点识别目的基因，并使目的基因发生双链断裂，而在断裂处，小分子化合物发挥作用，进行同源重组修复，高效的完成基因组定点修饰，经小分子化合物处理的细胞基因组定点修饰效率显著提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110846297B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN201911170441.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶，葡聚糖酶和纤维素酶，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号：CN106086068B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN106086068A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
Applicant: 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN110846337B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN201911170226.5
申请日：2019-11-26
Applicant: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC: C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。
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公开(公告)号：CN110564774B
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN201910782035.8
申请日：2019-08-23
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用修饰的ssODN提高细胞基因组定点修饰效率的方法。该方法通过CRISPR/Cas9系统与经修饰后的ssODN共同作用于细胞来实现。具体地为，CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段，可以定点识别目的基因，并使目的基因发生双链断裂，而在断裂处ssODN与目的基因碱基互补配对，高效的完成基因组定点修饰，而经修饰后的ssODN可以显著提高定点修饰的效率。
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