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公开(公告)号：CN105647855A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610088028.4
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2509/10
Abstract: 本发明公开了一种新生仔猪睾丸生殖干细胞(mGSCs)的高效获取方法，其包括以下步骤：通过两步酶法消化获取新生仔猪的睾丸组织单细胞悬液；利用差速贴壁法去除睾丸组织中成纤维类的贴壁细胞；差速贴壁5次以后，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和mGSCs；利用密度梯度离心方法将淋巴细胞和红细胞与mGSCs分离，即得到高纯度的mGSCs。本发明的方法操作简单，重复性好，成功率高，高效的获取高比例的mGSCs，对于后期研究mGSCs性质及其应用具有重要作用。不仅可应用于猪mGSCs生物学性质研究的科研平台、也可以在猪mGSCs介导的动物育种、品种改良和濒危品种保存等方面具有潜在的应用前景。
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公开(公告)号：CN104673742B
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201510065430.6
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究。
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公开(公告)号：CN109439688A
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201811476996.8
申请日：2018-12-04
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/867 , C12N7/01 , C12N5/10 , C07K14/47
Abstract: 本发明公开一种重组慢病毒载体、重组慢病毒及其应用。本发明是在慢病毒载体多克隆位点的上游插入HSA信号肽，下游插入纯化标签6×His序列，得到改装的慢病毒载体，然后将6′His-OPN片段插入到改装的慢病毒载体的XbaI和BamHI酶切位点之间得到重组慢病毒载体。本发明通过稳转CHO细胞系，纯化后得到OPN重组蛋白，表达时间和水平可以人为的控制，纯化便捷，结构更接近于天然蛋白，本身更加有活性，功能更全面。该蛋白加入到猪体外受精培养系中，可大大提高受精率，改善胚胎的发育。可进一步应用到猪精液中，提高种猪的繁殖率。此蛋白的出现会给猪场带来更好的发展前景，将养猪业推向新的发展阶段。
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公开(公告)号：CN105624101A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610087392.9
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2500/32 , C12N2500/40 , C12N2500/44 , C12N2500/84 , C12N2501/31 , C12N2506/04
Abstract: 本发明公开了一种猪生殖干细胞体外分化精子的建立方法，其包括步骤：仔猪睾丸组织经分离培养，获取原代仔猪睾丸组织成纤维细胞和生殖干细胞；采用构建体外诱导精子分化的“Niche”的培养基培养睾丸组织成纤维细胞15天，得到体外诱导精子分化的“Niche”饲养层；将生殖干细胞接种至“Niche”饲养层上，培养27～30天，经细胞生物学分析，体外获得单倍体精子样细胞。本发明方法操作简单，重复性好，是猪mGSCs体外分化研究的一项重要突破，这项发明对于猪胚胎体外操作和转基因育种研究将提供重要的基础技术，同时对于其他物种精子体外分化和人类辅助生殖的研究也具有重要的参考价值。
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公开(公告)号：CN105624105B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610087719.2
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105624105A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610087719.2
申请日：2016-02-16
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN105046083A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510431755.1
申请日：2015-07-21
Applicant: 华南农业大学
IPC: G06F19/00
Abstract: 本发明公开了一种评定大白公猪受精能力的数学模型及其建立方法，其建立方法包括步骤：对大白公猪数据样本的预测变量进行数据描述；再进行系统聚类，并依据公猪精液受精能力相关的样本数据对不同受精力水平的大白公猪进行划分，划分为高受精能力公猪群和低受精能力公猪群；再进行聚类后的判别分析和Logistic回归分析，生成具体的数学函数。本发明所建立的数学模型的系数及预测准确率可靠，能够提供一种适合广东省种猪场评定在役大白公猪受精能力的函数模型，可作为评定大白公猪受精能力的依据；对于缩小公猪间受精能力的梯度变化区间，以及准确预测大白公猪受精能力水平具有重要意义。
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公开(公告)号：CN104673742A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510065430.6
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究。
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公开(公告)号：CN105046083B
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201510431755.1
申请日：2015-07-21
Applicant: 华南农业大学
IPC: G06F17/50
Abstract: 本发明公开了一种评定大白公猪受精能力的数学模型及其建立方法，其建立方法包括步骤：对大白公猪数据样本的预测变量进行数据描述；再进行系统聚类，并依据公猪精液受精能力相关的样本数据对不同受精力水平的大白公猪进行划分，划分为高受精能力公猪群和低受精能力公猪群；再进行聚类后的判别分析和Logistic回归分析，生成具体的数学函数。本发明所建立的数学模型的系数及预测准确率可靠，能够提供一种适合广东省种猪场评定在役大白公猪受精能力的函数模型，可作为评定大白公猪受精能力的依据；对于缩小公猪间受精能力的梯度变化区间，以及准确预测大白公猪受精能力水平具有重要意义。
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公开(公告)号：CN105018430B
公开(公告)日：2018-08-31
申请号：CN201510065393.9
申请日：2015-02-06
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , A61K35/28 , A61K39/00 , A61P43/00
Abstract: 本发明公开了一种长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白小公猪的骨髓细胞，培养液培养20‑28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得细胞形态均一的F3代的长白仔猪bMSCs；利用携带LargeT慢病毒液侵染F3代的长白仔猪bMSCs，细胞筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；将稳定表达Egfp的细胞株，传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得长白仔猪骨髓间充质干细胞永生系。本发明获得了能支持猪bMSCs稳定培养的系统，促使细胞体外快速稳定增殖，并维持原代的生物学特征，证明得到了永生的长白仔猪bMSCs，可以深入研究猪bMSCs生物学性质和应用于药物或疫苗研发。
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