公开(公告)号：CN105647855A

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201610088028.4

申请日：2016-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 白银山 ,  张守全 ,  朱翠 ,  冯美莹 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/076

CPC classification number: C12N5/061 ,  C12N2509/10

Abstract: 本发明公开了一种新生仔猪睾丸生殖干细胞(mGSCs)的高效获取方法，其包括以下步骤：通过两步酶法消化获取新生仔猪的睾丸组织单细胞悬液；利用差速贴壁法去除睾丸组织中成纤维类的贴壁细胞；差速贴壁5次以后，收集未贴壁细胞，所述未贴壁细胞中含有淋巴细胞、红细胞和mGSCs；利用密度梯度离心方法将淋巴细胞和红细胞与mGSCs分离，即得到高纯度的mGSCs。本发明的方法操作简单，重复性好，成功率高，高效的获取高比例的mGSCs，对于后期研究mGSCs性质及其应用具有重要作用。不仅可应用于猪mGSCs生物学性质研究的科研平台、也可以在猪mGSCs介导的动物育种、品种改良和濒危品种保存等方面具有潜在的应用前景。

公开(公告)号：CN105624101A

公开(公告)日：2016-06-01

申请号：CN201610087392.9

申请日：2016-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 白银山 ,  张守全 ,  朱翠 ,  冯美莹 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/076

CPC classification number: C12N5/061 ,  C12N2500/32 ,  C12N2500/40 ,  C12N2500/44 ,  C12N2500/84 ,  C12N2501/31 ,  C12N2506/04

Abstract: 本发明公开了一种猪生殖干细胞体外分化精子的建立方法，其包括步骤：仔猪睾丸组织经分离培养，获取原代仔猪睾丸组织成纤维细胞和生殖干细胞；采用构建体外诱导精子分化的“Niche”的培养基培养睾丸组织成纤维细胞15天，得到体外诱导精子分化的“Niche”饲养层；将生殖干细胞接种至“Niche”饲养层上，培养27～30天，经细胞生物学分析，体外获得单倍体精子样细胞。本发明方法操作简单，重复性好，是猪mGSCs体外分化研究的一项重要突破，这项发明对于猪胚胎体外操作和转基因育种研究将提供重要的基础技术，同时对于其他物种精子体外分化和人类辅助生殖的研究也具有重要的参考价值。

公开(公告)号：CN105624105B

公开(公告)日：2020-01-21

申请号：CN201610087719.2

申请日：2016-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 白银山 ,  张守全 ,  冯美莹 ,  朱翠 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。

公开(公告)号：CN105624105A

公开(公告)日：2016-06-01

申请号：CN201610087719.2

申请日：2016-02-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 白银山 ,  张守全 ,  冯美莹 ,  朱翠 ,  卫恒习 ,  李莉

IPC: C12N5/0775

Abstract: 本发明公开了一种猪睾丸间质祖细胞PLCs的长期培养方法，其中包括体外分离、检测和分化，利用猪PLCs的体外增殖培养基培养仔猪睾丸成纤维细胞5～8天后，得到PLCs克隆集落；利用猪PLCs的分化培养基进行培养后，第3天PLCs开始向成熟睾丸间质细胞分化，然而在增殖培养基中培养，在体外最长维持时间达到了6个月。本发明首次建立起一套成熟的猪PLCs的分离、培养、检测和分化的完善方法，最终确立的不同体外培养体系可以实现控制PLCs在体外维持增殖和分化。本发明的方法对于体外研究PLCs生物学性质，以及药物研发和疫苗生产等方面应用具有潜在应用价值。