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公开(公告)号：CN119950678A
公开(公告)日：2025-05-09
申请号：CN202510170206.7
申请日：2025-02-17
Applicant: 华南农业大学
IPC: A61K38/16 , A61K31/546 , A61P31/04
Abstract: 本发明属于生物医药的技术领域，公开了抗菌肽Chicken Cath‑3协同增效抗生素在抗耐药铜绿假单胞菌感染中的应用。本发明通过棋盘法最小抑制浓度试验，体外时间‑杀菌曲线实验验证了抗菌肽Chicken Cath‑3与CTX联合用药对抗耐药铜绿假单胞菌具有明显的协同增效作用，所述的抗菌肽Chicken Cath‑3能够显著提高CTX抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌株的杀菌能力。本发明提供了新的联合用药策略，为解决铜绿假单胞菌日趋严重的耐药问题提供了新的研究思路和方向。
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公开(公告)号：CN110066820B
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN201910355729.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光菌株E.coli C600及构建方法与应用。通过构建含有R6k复制子、以两个ISApl1夹着Lux基因簇和亚碲酸盐耐药基因形成的转座单元以及RP4接合转移基因的重组质粒，将所述重组质粒转入其能够复制的宿主菌中得到重组菌株，再将所述的重组菌株与E.coli C600混合培养，即可筛选得到所述的荧光菌株E.coli C600。所述的荧光E.coli C600获得外援DNA的能力不受影响，稳定性强，能够稳定遗传，荧光不会随着细菌传代而丢失，可作为接合实验的受体菌。所述的荧光E.coli C600在质粒接合转移相关领域中能够更高效、直观地鉴别受体菌和接合子，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110129246B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR‑LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN110129349A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910282838.7
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19-tpm质粒和pUC19-RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX-RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX-RP4质粒和pBBR1MCS4-LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110066820A
公开(公告)日：2019-07-30
申请号：CN201910355729.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种荧光菌株E.coli C600及构建方法与应用。通过构建含有R6k复制子、以两个ISApl1夹着Lux基因簇和亚碲酸盐耐药基因形成的转座单元以及RP4接合转移基因的重组质粒，将所述重组质粒转入其能够复制的宿主菌中得到重组菌株，再将所述的重组菌株与E.coli C600混合培养，即可筛选得到所述的荧光菌株E.coli C600。所述的荧光E.coli C600获得外援DNA的能力不受影响，稳定性强，能够稳定遗传，荧光不会随着细菌传代而丢失，可作为接合实验的受体菌。所述的荧光E.coli C600在质粒接合转移相关领域中能够更高效、直观地鉴别受体菌和接合子，具有良好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115109791B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202210710412.9
申请日：2022-06-22
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种基于IncQ型质粒泛宿主的功能基因递送载体、构建方法和应用。本发明以pLHM‑10‑1质粒为模板，在mob区和rep区处设计引物进行PCR扩增，以pUC19质粒为模板，在Amp区设计引物进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳纯化回收，两片段进行重组，转化至大肠杆菌E.Coli Dh5α感受态细胞复苏，再将其涂布于含有氨苄西林(ampicillin，AMP)的培养基上，挑取单菌落，进行菌落PCR，测序验证得到所述递送载体。本发明的载体质粒具有体积小，宿主范围广，可搭载的功能基因种类丰富、抗性标记替换较为简便等优势，适用于不同功能基因的泛宿主递送。
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公开(公告)号：CN110129349B
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN201910282838.7
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19‑tpm质粒和pUC19‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110079540B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201910282837.2
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110129246A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR-LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN110117605A
公开(公告)日：2019-08-13
申请号：CN201910282847.6
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC26-tpm质粒和pUC26-RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建p26-RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切p26-RP4质粒和pBBR1MCS4-LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。将本发明中获得的自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，得到荧光标记的大肠杆菌；最后将其与目标菌株共培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高，可用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物中。
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