公开(公告)号：CN119510774A

公开(公告)日：2025-02-25

申请号：CN202411704065.4

申请日：2024-11-26

Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院

Inventor： 孙宇 ,  宗妍君 ,  刘晓宙 ,  赵正东 ,  史欣雨

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明提供SPTBN1作为靶点在治疗GJB2相关感音神经性听力损失中的应用，属于感音神经性听力技术领域。包括稳转细胞系的构建：HEK293T细胞使用添加了10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基，在37℃、95％空气和5％CO2的湿化培养箱中培养，当细胞生长到80‑90％汇合度时，进行细胞传代；IP‑MS分析：使用ProteinA/G免疫沉淀磁珠纯化蛋白复合物，将提取的部分蛋白质作为input，然后将2μganti‑Cx26抗体添加到剩余的蛋白提取物中，轻轻吹打混合，4℃翻转摇床孵育过夜；免疫荧光观察Cx26与SPTBN1共定位：构建表达WT‑Cx26及Mut‑Cx26的稳转细胞系；免疫共沉淀(Co‑IP)验证：构建表达WT‑Cx26的稳转细胞系。本发明通过基因治疗补充完整蛋白靶向性较低、治疗时间窗短等治疗方式的限制，为GJB2相关听力损失提供新见解、新靶点、新治疗。

公开(公告)号：CN118308425A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410545477.1

申请日：2024-04-29

Applicant: 华中科技大学同济医学院附属协和医院

Inventor： 孙宇 ,  刘晓宙 ,  史欣雨 ,  宗妍君 ,  赵正东

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0275 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明提出了GJB2基因纯合点突变小鼠模型的构建方法及应用，所述构建方法采用CRISPR/Cas9技术，结合p.F142L或p.D50N两种GJB2基因纯合点突变对受精卵进行同源重组，然后移植到假孕雌鼠体内待孕产仔，在F0代小鼠中筛选得到；所述小鼠模型均为GJB2基因个别位点突变，而非GJB2基因全序列敲除，获得的小鼠听力表型更贴近临床上患者携带的GJB2基因突变的听力损失类型和严重程度。所述模型可用于更准确地模拟GJB2基因纯合点突变导致导致先天性耳聋的听力表型、内耳病理和发病机制，从而实现内耳靶向药物的研发和GJB2基因突变导致耳聋的治疗。