公开(公告)号：CN108651775A

公开(公告)日：2018-10-16

申请号：CN201810474328.5

申请日：2018-05-17

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  孟愔 ,  胡瑞雪 ,  袁勇超 ,  李丹 ,  韩俊国

IPC: A23K50/80 ,  A23K10/30 ,  A23K20/163 ,  A61K36/739 ,  A61P37/04 ,  A61K31/715

Abstract: 本发明公开了一种提高小龙虾免疫力的中药复方制剂及其制备方法和应用，该中药复方制剂由一定配比的甘草、地榆、党参、茯苓、板蓝根和黄芪多糖为原料制备而成。该中药复方的制备方法是：将甘草、地榆、党参、茯苓和板蓝根分别采用超微粉碎技术进行粉碎，分别得到甘草超微粉、地榆超微粉、党参超微粉、茯苓超微粉和板蓝根超微粉，将甘草超微粉、地榆超微粉、党参超微粉、茯苓超微粉、板蓝根超微粉和黄芪多糖混合均匀。该中药复方配方合理，可作为小龙虾饲料添加剂，能降低小龙虾发病率的同时还能加快生长。该中药复方的制备方法极其简单，操作方便。

公开(公告)号：CN117867174A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202311855019.X

申请日：2023-12-29

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  罗小红 ,  廖明聪 ,  陈楠 ,  胡瑞雪

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种用于检测白斑综合征病毒（White spot syndrome virus,WSSV）的PCR引物，其序列如SEQ ID NO.2～3所示，该引物能扩增WSSV病毒主要囊膜蛋白VP19基因的196bp片段，本发明还公开了一种检测WSSV的一步式PCR方法，该方法能够特异性检测WSSV，是一种快速且具有极强灵敏性的检测方法，相比于巢式PCR标准检测方法，本发明扩增反应时长缩短了66.13%，理论和诊断灵敏性最低检出限分别为1.83copies/μL和0.82fg/μL，分别提高了100和1000倍。

公开(公告)号：CN116574824A

公开(公告)日：2023-08-11

申请号：CN202310664001.5

申请日：2023-06-05

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 胡瑞雪 ,  于子润 ,  顾泽茂

IPC: C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6851 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了血清胁迫条件下米尔伊丽莎白菌荧光定量内参基因的筛选及应用。本发明筛选了5个内参基因，并通过综合分析筛选到最优用于血清胁迫条件下米尔伊丽莎白菌荧光定量的内参基因是gyrB基因，为血清胁迫条件下米尔伊丽莎白菌目的基因的表达分析提供了有效的内参基因。新开发的内参基因不仅有利于提高血清胁迫条件下米尔伊丽莎白菌目的基因表达水平研究的稳定性和可靠性，而且对伊丽莎白菌属其它物种基因表达量校正提供了重要的候选基因资源。

公开(公告)号：CN110684855B

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN201911000642.0

申请日：2019-10-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  张琦 ,  胡瑞雪

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种检测米尔伊丽莎白菌的实时荧光定量PCR检测方法，步骤是：A、引物设计：上游引物：5'ACCTTAAAAGACAAGAAGCTG 3'；下游引物：5'AGTTGTCTTCACCGTATGCC 3'；B、反应体系的优化：得到反应体系为：SYBR Premix Ex Taq 2×SYBR Green Mix 10μL，10pmol/μL上下游引物各1μL，RNase Free ddH2O 7μL；C、阳性标准品的制备：提取米尔伊丽莎白菌样品DNA，为模板，上游引物和下游引物扩增片段长度，对目的片段使用胶回收试剂盒切胶回收后克隆到pMD‑19T载体上，转化导入DH5α，扩大培养后提取重组质粒，测定核酸浓度，转化为拷贝数，为阳性标准品；D、标准曲线的建立：将质粒稀释，以稀释液为模板，按照反应体系进行PCR扩增，建立标准曲线；E、待测样品的检测。解决了其中存在的费时费力、容易污染及检测结果波动性的问题。

公开(公告)号：CN110452991A

公开(公告)日：2019-11-15

申请号：CN201910432479.9

申请日：2019-05-16

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 姜勋平 ,  种玉晴 ,  胡瑞雪 ,  刘桂琼

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于动物分子育种技术领域，涉及一种提高湖羊产羔数的单倍型组合分子标记及其应用。所述标记是由位于绵羊15号染色体的Hemoglobin beta(HBB)基因上从第一外显子起第187、200、209位等共计20个核苷酸位点组成的单倍型组合(SEQ ID NO：1)。本发明还公开了一组用于鉴定上述单倍型组合分子标记的引物，引物1的上游序列为：SEQ ID NO：2，下游序列为：SEQ ID NO：3；引物2的上游序列为：SEQ ID NO：4，下游序列为：SEQ ID NO：5。本发明提供的单倍型组合分子标记与湖羊的产羔数显著相关。可以通过鉴定该标记来筛选多羔性状的湖羊品系，具有良好的经济效益和广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN108651775B

公开(公告)日：2022-02-08

申请号：CN201810474328.5

申请日：2018-05-17

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  孟愔 ,  胡瑞雪 ,  袁勇超 ,  李丹 ,  韩俊国

IPC: A23K50/80 ,  A23K10/30 ,  A23K20/163 ,  A61K36/739 ,  A61P37/04 ,  A61K31/715

Abstract: 本发明公开了一种提高小龙虾免疫力的中药复方制剂及其制备方法和应用，该中药复方制剂由一定配比的甘草、地榆、党参、茯苓、板蓝根和黄芪多糖为原料制备而成。该中药复方的制备方法是：将甘草、地榆、党参、茯苓和板蓝根分别采用超微粉碎技术进行粉碎，分别得到甘草超微粉、地榆超微粉、党参超微粉、茯苓超微粉和板蓝根超微粉，将甘草超微粉、地榆超微粉、党参超微粉、茯苓超微粉、板蓝根超微粉和黄芪多糖混合均匀。该中药复方配方合理，可作为小龙虾饲料添加剂，能降低小龙虾发病率的同时还能加快生长。该中药复方的制备方法极其简单，操作方便。

公开(公告)号：CN110684855A

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201911000642.0

申请日：2019-10-21

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  张琦 ,  胡瑞雪

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种检测米尔伊丽莎白菌的实时荧光定量PCR检测方法，步骤是：A、引物设计：上游引物：5'ACCTTAAAAGACAAGAAGCTG 3'；下游引物：5'AGTTGTCTTCACCGTATGCC 3'；B、反应体系的优化：得到反应体系为：SYBR Premix Ex Taq 2×SYBR Green Mix 10μL，10pmol/μL上下游引物各1μL，RNase Free ddH2O 7μL；C、阳性标准品的制备：提取米尔伊丽莎白菌样品DNA，为模板，上游引物和下游引物扩增片段长度，对目的片段使用胶回收试剂盒切胶回收后克隆到pMD-19T载体上，转化导入DH5α，扩大培养后提取重组质粒，测定核酸浓度，转化为拷贝数，为阳性标准品；D、标准曲线的建立： 将质粒稀释，以稀释液为模板，按照反应体系进行PCR扩增，建立标准曲线；E、待测样品的检测。解决了其中存在的费时费力、容易污染及检测结果波动性的问题。

公开(公告)号：CN108740329A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810473325.X

申请日：2018-05-31

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 顾泽茂 ,  孟愔 ,  袁勇超 ,  李丹 ,  胡瑞雪 ,  韩俊国

IPC: A23K10/30 ,  A23K20/163 ,  A23K50/80

CPC classification number: A23K10/30 ,  A23K20/163 ,  A23K50/80

Abstract: 本发明公开了一种小龙虾用复方植物免疫增强剂及其制备方法和应用，该复方植物免疫增强剂由一定配比的甘草、茵陈、板蓝根、金银花和黄芪多糖为原料制备而成。该复方植物免疫增强剂的制备方法是：将甘草、茵陈、板蓝根、金银花和黄芪多糖分别采用超微粉碎技术进行粉碎，分别得到甘草超微粉、茵陈超微粉、板蓝根超微粉和金银花超微粉，将甘草超微粉、茵陈超微粉、板蓝根超微粉、金银花超微粉和黄芪多糖混合均匀，得到所述的小龙虾用复方植物免疫增强剂。该免疫增强剂配方合理，可作为小龙虾饲料添加剂，在增强小龙虾免疫功能的同时还能促进小龙虾的生长。该免疫增强剂的制备方法及其简单，操作方便。

公开(公告)号：CN115044554B

公开(公告)日：2023-12-08

申请号：CN202210508570.6

申请日：2022-05-11

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 胡瑞雪 ,  顾泽茂 ,  艾单寒 ,  侯家昊 ,  陈丹

IPC: C12N5/0786

Abstract: 本发明公开了一种黑斑蛙脾脏巨噬细胞的分离纯化及原代培养方法，包含以下步骤：(1)脾脏的获取；(2)将脾脏组织用PBS缓冲液清洗，然后放入AIM液中浸泡；(3)将浸泡后的组织块转移至细胞筛，研磨组织块并用漂洗液冲洗；(4)收集研磨过筛后的细胞悬液，加入到预先配制好的Percoll分离液，离心；(5)无菌吸管取出目的细胞层，用漂洗液漂洗；(6)将漂洗后的细胞用完全培养基重悬，于28‑37℃条件下培养12‑24h，使用差速贴壁法对获得的细胞进行纯化。本发明首次建立蛙脾脏巨噬细胞的分离和培养方法，该方法操作简单方便，培养效率和成功率高，为进一步研究黑斑蛙巨噬细胞的功能奠定了基础。

公开(公告)号：CN115044554A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210508570.6

申请日：2022-05-11

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 胡瑞雪 ,  顾泽茂 ,  艾单寒 ,  侯家昊 ,  陈丹

IPC: C12N5/0786

Abstract: 本发明公开了一种黑斑蛙脾脏巨噬细胞的分离纯化及原代培养方法，包含以下步骤：(1)脾脏的获取；(2)将脾脏组织用PBS缓冲液清洗，然后放入AIM液中浸泡；(3)将浸泡后的组织块转移至细胞筛，研磨组织块并用漂洗液冲洗；(4)收集研磨过筛后的细胞悬液，加入到预先配制好的Percoll分离液，离心；(5)无菌吸管取出目的细胞层，用漂洗液漂洗；(6)将漂洗后的细胞用完全培养基重悬，于28‑37℃条件下培养12‑24h，使用差速贴壁法对获得的细胞进行纯化。本发明首次建立蛙脾脏巨噬细胞的分离和培养方法，该方法操作简单方便，培养效率和成功率高，为进一步研究黑斑蛙巨噬细胞的功能奠定了基础。